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昆虫细胞作为重组病毒的受体能成功高效地表达外源基因，生产具有重要医用价值、具备天然活性的生物工程制品，从而使昆虫细胞培养倍受青睐。目前，可以通过转基因的方法改良现有细胞，从而获得高产昆虫杆状病毒和外源蛋白的昆虫细胞系。 本研究用磷酸钙转染法和电穿孔两种方法，分别将SV40病毒的大T抗原基因转入第80代的Tn5B1-4细胞，经G418筛选，克隆，共得到转基因细胞克隆株62株。通过细胞传代，选出生长且状况良好的克隆株共有54株。54株细胞系分别经PBS，AMD处理，病毒滴度和多角体产量比较筛选出10个细胞克隆株：Tn5B-1-1、Tn5B-1-12、Tn5B-1-15、Tn5B-1-25、Tn5B-1-26、Tn5B-1-30、Tn5B-1-33、Tn5B-2-3、Tn5B-2-9及Tn5B-2-12，这些细胞系分别接种昆虫病毒TnGV、TnNPV、MsNPV、PiNPV，其中仅Tn5B-1-12对所测的所有NPV病毒敏感，将此转基因细胞系命名为Tn5B-SV-40(简写为Tn5B-40)。 Tn5B-40细胞形态主要为纺锤形和圆形，贴壁生长，大小为18.5×42μm。增殖很快，群体倍增时间为22小时，最大生长密度可达2.2×10~6cells／ml。对AcMNPV病毒感染率达95％，多角体产量平均为115 OBs／cell，是一株高产杆状病毒的细胞系。 Tn5B-40有较强的营养抗逆性，细胞在无营养的PBS盐缓冲液中1天以后，Tn5B-40细胞有70％存活，比野生型Tn581-4细胞高出30％，第5天时，Tn581-4细胞全部死亡，Tn5B-40到第6天仍然有5％存活细胞。 用含不同浓度放线菌素D的培养基处理Tn5B-40细胞1小时，当放线菌素D浓度为0.31，0.62，1.25和2.5μg／ml时，Tn5B-40细胞的存活率分别比Tn581-4高出38％，50％，60％和35％，当浓度高达5μg／ml时，Tn581-4细胞全部死亡而Tn5B-40细胞仍有30％的生存率。说明此细胞具有抗凋亡的特性。 Tn5B-40是一株高表达重组蛋白的昆虫细胞系。用重组病毒AcMNPV-β-gal侵染细胞，Tn5B-40细胞内β-半乳糖苷酶的产量明显高于野生型细胞系，到第六天，其表达水平达到Tn581-4的2.3倍，第8天时比Tn581-4细胞高出35％，达3.4×10~4IU／ml。随着时间的延长，Tn5B-40培养基中酶量也逐渐增加，第4天就比第2天提高了5倍。第8天时Tn5B-40细胞内和培养基中的酶总表达水平达到最高5.4×10~4IU／ml。AcMNPV-SEAP感染此细胞，其细胞内的分泌型碱性磷酸酶表达水平明显低于培养基中的表达水平，最高只达1 IU／ml。Tn5B-40细胞分泌在培养基中的SEAP在细胞培养后期较高，第9天时比Tn581-4高出25％。Tn5B-40的SEAP总表达水平最高值达到5.7IU／ml。 昆虫病毒AcMNPV在Tn5B-40细胞中离体传代10次，病毒未出现继代效应，其病毒滴度、多角体形态及产量、杀虫毒力均无明显变化。Tn5B一40细胞是昆虫杆状病毒离体复制的优良细胞系。