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背景:吉非替尼（gefitinib）是表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）突变晚期肺腺癌治疗的一线药物,有效率70-80%,治疗过程中会不可避免地出现耐药,影响患者的生存期。吉非替尼耐药与T790M二次突变、MET（mesencnymal epitnenal transition factor）扩增、下游信号通路磷酸酯酶及张力蛋白同源物（phosphatase and tensin homology,PTEN）基因表达缺失等有关,但仍有部分耐药原因不清楚。表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKI）的耐药问题目前已经成为非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）靶向治疗临床应用的主要瓶颈,只有明确了 EGFR-TKI的耐药原因和机制,才能够找到克服耐药的方法,延长EGFR突变非小细胞肺癌患者的生存期。研究发现外泌体（exosomes,exo）在使癌细胞获得耐药性方面起着重要作用,但外泌体在吉非替尼耐药过程中的作用尚不清楚。长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）是长度大于200个核苷酸的非编码RNA,它广泛参与肿瘤的基因调控,调控肺癌的发生、侵袭、转移和耐药,也参与EGFR-TKI耐药的调控。近年来有研究发现,外泌体作为多种生物学成分的重要载体,可以通过运输lncRNA介导耐药。目的:分析外泌体及lncRNA对肺癌吉非替尼药物敏感性的调节作用,探讨吉非替尼耐药机制,为克服吉非替尼耐药寻找新的预测指标和治疗靶点。方法:1.采用ExoQuick-TC试剂盒法提取NSCLC吉非替尼敏感细胞（HCC827）、吉非替尼耐药细胞（HCC827/GR）培养上清中的外泌体并进行鉴定,用共育实验、CCK-8实验检测与外泌体共育后HCC827细胞对吉非替尼的半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC50）及细胞存活率变化。2.对HCC827和HCC827/GR细胞进行lncRNA基因芯片分析,通过差异倍数表达、基因本体论（gene oncology,GO）、KEGG 通路（kyoto encyclopedia of genes and genomes pathway,KEGG PATHWAY）分析确定 lincRNA00635-001为可能的吉非替尼耐药相关分子。小干扰RNA（small interference RNA,SiRNA）瞬转法下调lincRNA00635-001在耐药细胞株中的表达,通过CCK-8实验、流式细胞术检测lincRNA00635-001对HCC827/GR细胞吉非替尼药物敏感性、凋亡、细胞周期的影响。3.通过实时定量 PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）法检测lincRNA00635-001在40例EGFR敏感性突变非小细胞肺腺癌组织中的表达水平,分析lincRNA00635-001的表达水平与临床病理特征、吉非替尼疗效的关系。4.分别用PBS和提取自HCC827细胞、HCC827/GR细胞、SiRNA瞬转下调lincRNA00635-001表达的HCC827/GR细胞、空转染组HCC827/GR细胞来源的外泌体（分别命名为 S/exo、R/exo、SiRNA-R/exo、SiNC-R/exo）,与 HCC827细胞共培养,CCK-8法检测HCC827细胞对吉非替尼IC50值变化及细胞存活率变化,qRT-PCR法检测HCC827细胞lincRNA00635-001表达变化。结果:1.与S/exo和阴性对照组相比,与R/exo共育后,HCC827细胞的IC50值明显升高（P＜0.01）,在吉非替尼作用下的细胞存活率增加（P＜0.01）。2.GO和KEGG分析发现lincRNA00635-001主要与凋亡、细胞周期等生物学过程有关。与对照组相比,下调lincRNA00635-001表达的HCC827/GR细胞对吉非替尼的IC50值下降（P＜0.05）;下调lincRNA00635-001表达促进HCC827/GR细胞在吉非替尼存在下的凋亡（P＜0.05）,但对细胞周期无明显影响。3.LincRNA00635-001在EGFR突变肺腺癌病人组织中的表达与年龄、性别、吸烟情况、肿瘤位置、肿瘤分化程度没有相关性（P＞0.05）,而与临床分期、吉非替尼疗效有相关性（P＜0.05）。4.与SiRNA-R/exo组相比,与R/exo、SiNC-R/exo共育的HCC827细胞对吉非替尼的IC50值升高（P＜0.01）,细胞存活率增加（P＜0.05）;与SiRNA-R/exo组相比,与 R/exo、SiNC-R/exo 共育的 HCC827 细胞 lincRNA00635-001 表达水平升高（P＜0.01）。结论:吉非替尼耐药细胞可以通过外泌体向敏感细胞传递耐药性;lincRNA006-35-001是影响吉非替尼耐药性状的关键分子,可能成为预测吉非替尼疗效的标志物和逆转吉非替尼耐药的潜在靶点;吉非替尼耐药细胞外泌体通过转运linc-RNA00635-001向敏感细胞传递耐药性。背景:肺癌是呼吸系统常见的恶性肿瘤,是目前全球发病率、死亡率最高的恶性肿瘤之一,非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC）是肺癌的主要病理类型,占全部肺癌的80%。尽管靶向治疗和免疫治疗明显改善了非小细胞肺癌病人的预后,但有60%的肿瘤没有驱动性基因突变,而且只有15-25%的病人从免疫治疗中获益[1,21。细胞毒性药物治疗可以使许多病人受益,其花费是靶向治疗或免疫治疗的十分之一甚至千分之一,仍在肺癌治疗中处于基石地位。目前晚期非小细胞肺癌肺癌的标准一线治疗-含铂两药方案有效率仅30%左右[3]。因此寻找能够预测非小细胞肺癌化疗敏感/耐药性的方法,对指导临床个体化用药具有重要意义。但目前常用的血清肿瘤标志物如（carcino embryonic antigen,CEA）、糖类抗原 199（carbohydrate antigen199,CA199）、胃泌素释放肽前体（progastrin-releasingpeptide,proGRP）,细胞角蛋白片段（CYFRA21-1）等,在预测疗效方面敏感性和特异性较差,需要寻找新的肿瘤标志物提高肺癌化疗疗效。由于血管生成在恶性肿瘤生长和转移中的重要作用,血管生成因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）作为肿瘤标志物的作用受到广泛研究,但目前对VEGF作为血清标志物进行的研究结果富有争议性。本课题组前期应用Luminex液相芯片法检测332例非小细胞肺癌病人血清VEGF水平,发现VEGF水平低组病人较VEGF水平高组病人总体生存时间明显延长,VEGF水平是预测NSCLC病人生存的独立预后因素[4]。鉴于铂类联合化疗在非小细胞肺癌治疗中的重要地位,我们在本课题中进一步探讨用Luminex系统检测血清VEGF水平对非小细胞肺癌化疗的疗效预测作用。目的:应用Luminex液相芯片法检测非小细胞肺癌病人化疗前后血清VEGF水平,分析血清VEGF水平与非小细胞肺癌病人临床病理特征及含铂双药化疗疗效的关系,探讨VEGF对非小细胞肺癌病人化疗中的疗效预测作用,为寻找铂类药物化疗疗效血清标志物提供依据。材料与方法:分析江苏省肿瘤医院2011年9月～2015年8月收治的135例采用含铂双药化疗方案一线治疗的晚期非小细胞肺癌化疗病人。所有患者均经病理学或细胞学诊断证实为非小细胞肺癌,在化疗前及化疗后2周期检测血清VEGF水平。通过查阅病案采集病人信息（包括一般情况、临床病理特征、实验室检查指标等）,探讨血清VEGF水平与病人临床病理特征、含铂双药化疗疗效的关系,以明确是否能将血清VEGF水平作为评估采用含铂双药化疗进行初治的晚期非小细胞肺癌病人临床疗效的指标。实验数据通过SPSS19统计软件包进行统计学分析。结果:1.VEGF水平与临床病理因素的关系:所有病人的中位VEGF水平为134 pg/ml。化疗前血清VEGF水平与患者一般状态、TNM分期、分化程度、血小板数等因素无相关性（P＞0.05）;VEGFPLT水平与病理类型、原发灶部位、性别、年龄等因素之间无显著相关性（P＞0.05）。2.VEGF水平与非小细胞肺癌病人含铂双药化疗疗效的关系:化疗前血清VEGF水平与含铂双药化疗疗效之间无显著相关性（P＞0.05）。3.VEGF水平与非小细胞肺癌病人无进展生存期（Progression free survival,PFS）的关系:化疗前血清VEGF水平与铂类化疗病人的无进展生存期有相关性,以280pg/ml为截断值（Cutoff）将135例病人的VEGF水平分为高、低两组,两组病人铂类联合化疗的PFS有显著差异（P＜0.05）。结论:血清VEGF水平高可能是晚期NSCLC病人铂类一线联合化疗PFS的不良预后因子,但不能预测铂类联合化疗方案的疗效。