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目的探究华北理工大学附属医院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(Carbapenemresistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)与碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌(Carbapenem-susceptible Klebsiella pneumoniae,CSKP)的毒力因子分布差异及分子分型特点,并对不同omp K36变异型肺炎克雷伯菌的耐药特点、毒力特点和分子分型特点进行分析,为我床感染CRKP与CSKP菌株的管控和高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella pneumoniae,hv KP)的预测提供有价值的实验室依据。方法收集华北理工大学附属医院2017年12月至2018年12月临床感染肺炎克雷伯菌71株。应用Vitek 2-Compact全自动细菌鉴定/药敏分析仪和肺炎克雷伯菌体外溶血酵素基因(khe基因)进行菌株鉴定,药敏试验联合纸片扩散法(K-B法)对菌株进行筛选,分为CRKP组30株和CSKP组41株;用改良Hodge试验联合EDTA协同试验对CRKP菌株的耐药表型进行检测;应用拉丝试验鉴定hv KP菌株;PCR检测肺炎克雷伯菌的6种荚膜血清型(K1、K2、K5、K20、K54、K57)、7种毒力基因(rmp A、wab G、uge、ent B、aerobactin、iro N、kfu B)、4种膜孔蛋白omp K36变异型(omp K36 A、B、C、D),菌株携带毒力基因的个数用毒力分数表示;通过PFGE和MLST实验分析菌株之间的亲缘性及流行克隆;利用卡方检验或Fisher确切概率法分析CRKP与CSKP菌株毒力因子分布差异和分子分型特点,并对不同omp K36变异型肺炎克雷伯菌的耐药特点、毒力特点和分子分型特点进行分析。结果1拉丝试验阳性的菌株共有25株(42.3%),其中CSKP菌株的阳性率较CRKP菌株高,omp K36 C型菌株的阳性率较非C型菌株高,差异有统计学意义(P<0.05)。2荚膜血清型检出率为35.2%,包括K1型10株(40.0%)、K2型10株(40.0%)、K5型1株(4.0%)、K54型2株(8.0%)和K57型2株(8.0%),未检出K20型肺炎克雷伯菌。血清型主要检出于CSKP菌株和omp K36C型菌株,且以K1/K2型为主,差异有统计学意义(P<0.05)。3毒力基因检测结果显示,rmp A基因主要检出于CSKP菌株和omp K36 C型菌株,aerobactin基因主要检出于omp K36 C型菌株,CSKP菌株毒力分数明显高于CRKP,omp K36 C型菌株毒力分数明显高于非C型菌株,差异有统计学意义(P<0.05)。4 omp K36变异型可分为A型12株(16.9%)、B型2株(2.8%)、C型28株(39.4%)、D型26株(36.6%)和未分型3株(4.2%)。CRKP菌株主要为omp K36 D型,而CSKP菌株主要为omp K36 C型,差异有统计学意义(P<0.05)。5 PFGE分型共分为58个不同的型别,PFGE图谱的Dice系数在56%~100%之间。每个型别包括1~8株菌不等,其中优势型别中的菌株均为omp K36 D型CRKP菌株。6 MLST分型共分为30个STs,每个型别包括1~18株菌不等。其中ST11型最多(25.4%),其次为ST23型(14.1%)。CRKP菌株和omp K36非C型菌株的流行克隆为ST11型,CSKP菌株和omp K36 C型菌株的流行克隆为ST23。7药敏结果显示,71株肺炎克雷伯菌对头孢他啶、头孢吡肟、左氧氟沙星和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率较高,对复方新诺明、阿米卡星的耐药率较低,对多粘菌素和替加环素完全敏感。CRKP菌株对非碳青霉烯类抗菌药物的耐药率均高于CSKP菌株,omp K36 D型菌株耐药率均高于C型菌株,差异有统计学意义(P<0.05)。8耐药表型结果显示,CRKP菌株改良Hodge试验均为阳性,EDTA协同试验均为阴性,说明CRKP菌株均产碳青霉烯酶。9患者临床资料显示,CRKP菌株和omp K36 D型菌株的标本类型主要为痰标本,而CSKP菌株和omp K36 C型菌株主要为血液标本,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1肺炎克雷伯菌的血清型以K1/K2型为主,CSKP菌株的毒力远高于CRKP菌株,并且检出了CR-hv KP菌株。2 CRKP菌株存在明显的同源性,分子分型结果提示存在病区内部或院内不同病区之间的传播,其中CRKP菌株以克隆的传播方式为主,而CSKP菌株尚未发现以克隆的方式传播。3肺炎克雷伯菌以omp K36C型和omp K36 D型为主,其中omp K36 C型菌株毒力最高,omp K36 D型菌株耐药性最强。4 CRKP菌株主要为omp K36 D型,流行克隆为ST11,而CSKP菌株主要为omp K36 C型,流行克隆为ST23。图4幅;表19个;参46篇。