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目的:研究缺氧复氧(HR)条件下H9C2细胞中FOXO4与Chop依赖的凋亡通路的关系方法:首先建立H9C2细胞缺氧复氧模型。在缺氧复氧的情况下分步进行实验。第一部分:FOXO4 siRNA干扰,分组为a.正常组(control)b.缺氧复氧组(HR)c.HR+阴性病毒d.HR+FOXO4-siRNA;第二部分:Chop siRNA干扰,分组为:a.HR+阴性干扰片段b.HR+Chop-siRNA;第三部分:FOXO4-siRNA+Chop-过表达质粒,分组为a.正常组(control)b.缺氧复氧组(HR)c.HR+阴性d.HR+FOXO4-siRNA+Chop-过表达质粒。采用TUNEL检测凋亡情况;Western Blot检测各组FOXO4、Chop、Cleaved-caspase3蛋白表达情况;CHIP检测FOXO4与Chop的结合位点。结果:(1)在缺氧复氧条件下,H9C2细胞中FOXO4、Chop、Cleaved-caspase3蛋白表达较正常组明显升高(p<0.05),TUNEL检测凋亡水平也明显升高(p<0.05)。(2)沉默FOXO4后进行缺氧复氧处理,FOXO4、Chop、Cleaved-caspase3蛋白表达量较相应阴性对照组明显减少(p<0.05),TUNEL检测凋亡水平也明显降低(p<0.05);沉默Chop后进行缺氧复氧处理,Chop、Cleaved-caspase3蛋白表达量较相应阴性对照组明显减少(p<0.05)。(3)沉默FOXO4后再上调Chop,然后进行缺氧复氧处理,FOXO4蛋白表达量显著低于相应阴性对照组(p<0.05),Chop、Cleaved-caspase3蛋白表达量较相应阴性对照明显升高(p<0.05)。(4)染色质免疫共沉淀结果显示与正常组相比,缺氧复氧组明显刺激FOXO4与Chop启动子区域结合,差异具有统计学意义(p<0.05)。结论:(1)缺氧复氧条件下,H9C2细胞中FOXO4、Chop、Cleaved-caspase3表达显著增加,凋亡水平也增加;抑制FOXO4表达,Chop、Cleaved-caspse3表达显著降低,并且细胞凋亡减少。(2)缺氧复氧条件下抑制Chop表达,Cleaved-caspse3表达显著降低;抑制FOXO4,过表达Chop,Cleaved-caspse3表达明显升高。(3)缺氧复氧条件下,染色质免疫共沉淀结果显示FOXO4与Chop启动子区域结合,即FOXO4直接靶向结合Chop。FOXO4-Chop轴可能作为改善心肌缺血再灌注损伤作用的治疗靶点。