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苜蓿(Alfalfa)作为反刍动物最主要的粗饲料蛋白来源,可通过青贮保持其较高的饲用价值。本研究旨在通过制作青贮苜蓿饲料,分析其主要微生物组成,根据分析结果从中筛选青贮苜蓿的主要发酵菌种,选取青贮苜蓿的优势菌种调制高水分青贮苜蓿,评估菌种和不同组合比例对青贮苜蓿品质的影响。试验首先采用半干青贮技术调制青贮苜蓿并对其评分,根据宏基因组测序技术对青贮苜蓿中的微生物种群数量和群落组成进行分析。根据分析结果利用MRS、NA、LB、PDA以及麦氏培养基,采用好氧和厌氧两种培养方式从天然青贮苜蓿饲料中筛选微生物菌种;对筛选到的微生物菌种进行形态学和分子生物学的鉴定确定其种属。结果表明:在感官评分为优良的半干青贮苜蓿中,主要微生物群落(鉴定到属的水平)为海洋杆菌属(oceanobacillus)、乳杆菌属(Lactobacillis)和芽孢杆菌属(Bacillis),分别占到24.9%、14.3%、13.9%。在37℃有氧和厌氧条件下以不同培养基共分离出30株菌株,经过形态学和保守序列比对确定,其中15株为植物乳杆菌(L.plantarum),8株为枯草芽孢杆菌(B.subtilis);2株地衣芽孢杆菌(B.licheniformis);乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、阿氏芽孢杆菌(B.aryabhattai)、短小芽孢杆菌(B.pumilus)和解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)各1株。所筛选菌株和鉴定结果与宏基因组测序的分析结果相一致,表明青贮苜蓿中的优势微生物菌群为乳酸菌和芽孢杆菌。选取所筛选的植物乳杆菌、乳酸片球菌、枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌,分别以植物乳杆菌和乳酸片球菌分别按照1:1、1:2、2:1的菌液活菌数比例;植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和乳酸片球菌分别按照2:1:1、1:1:1、4:1:1的活菌数比例;植物乳杆菌、解淀粉芽孢杆菌和乳酸片球2:1:1、1:1:1、4:1:1的活菌数比进行组合,复合菌种添加总量为1.0×10~7cfu/g鲜重,对苜蓿鲜草进行调制。制作完成后对其发酵品质进行感官评定,同时测定其氨态氮与总氮的比例(NH-N/TN)、总有机酸以及pH值。结果表明:在感官评定上,植物乳杆菌与乳酸片球菌1:1、1:2、2:1组合和植物乳杆菌、解淀粉芽孢杆菌与乳酸片球菌菌种组合的感官评分均显著高于自然发酵组(P<0.05)。植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌与乳酸片球菌菌种组合感官评分均低于自然发酵组,差异显著(P<0.05)。在NH-N/TN上除了植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和乳酸片球菌菌种比例4:1:1组合外,其他各组合均低于自然发酵组,但差异不显著(P>0.05)。在pH值上除了植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和乳酸片球菌菌种比例4:1:1组合外,其他处理均显著低于自然发酵组(P<0.05)。总有机酸方面,各菌种组合中1:1:1的体积组合均显著低于自然发酵组(P<0.05),其他组合均高于自然发酵组,差异显著(P<0.05)。添加微生物菌种的各实验组青贮苜蓿感官评分均为优良等级,说明,添加以植物乳杆菌为主要菌种的微生物菌种组合能够有效改善青贮苜蓿饲料的感官评分,能够降低氨氮含量,能够提高总有机酸含量,有利于青贮苜蓿的调制和品质改善。