研究背景：神经内分泌免疫学是指人体神经系统、内分泌系统和免疫系统存在动态的相互联系，从整体水平上对机体做出调节，使机体对内在或者外来的应激因素做出反应，在维持机体内环境的稳定中起到重要作用。其中下丘脑-垂体-肾上腺轴(Hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA)是神经内分泌免疫网络最重要的一个调节通路。糖皮质激素(Glucocorticoids，GC)是HPA轴的关键性分子，在神经内分泌免疫网络的对话中起着很重要的沟通作用。在人体内，GC对免疫系统有着全面的调节性作用。这是使用外源性GC治疗很多免疫相关性疾病的一个重要理论基础。而越来越多的证据表明，临床上免疫性疾病的发生发展是免疫调节不平衡的结果，过去所有的治疗都集中在如何单方面抑制免疫系统的活动，而不去注意机体内在免疫调节的机制——神经内分泌免疫调节网络，所以到目前为止，免疫性疾病的治疗仍然没有突破性进展。神经内分泌免疫调节作用的重要靶细胞是人体免疫功能主要的执行者——外周血单个核细胞(Peripheral bloodmononuclear cells，PBMCs)。PBMCs对GC的反应性，存在很大的个体差异。对GC的反应性低下不单使外源性GC的治疗不能达到预期的效果，也使机体内源性的GC不能完全发挥其免疫调节作用，成为免疫相关性疾病的发生发展的一个重要诱因。GC效应的发挥主要通过其受体——糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor，GR)实现。研究发现，GR基因的启动子区存在多个启动子，均能独立启动GR的转录和翻译。不同启动子的使用会影响GR转录和翻译的结果，形成多种mRNA和蛋白质亚型。而多种GR亚型的存在，可能是GC反应多样化的一个重要分子基础。GR的启动子上还存在多个顺式作用元件，反式作用因子如转录因子可以与其结合调节GR的表达。活化的GR本身就可以和GR的启动子区结合，实现对自身表达的调控。因此GR启动子区对GC的反应性可能起着重要的调节作用。然而，目前对GR启动子在GC抵抗中的作用尚有争议，大部分的报道是来自于血液系统的恶性肿瘤。　　 目的：以PBMCs和原发性肾病综合征为研究目标，探讨GR启动子的使用对GC反应性的影响。在PBMCs中，GR启动子的使用和亚型的表达情况以及两者的关系；PBMCs中是否存在和启动子使用相关的GR自我调节机制。；原发性肾病综合征患者激素抵抗的现象是否和上述机制存在联系。　　 方法：⑴采用半定量RT-PCR方法检测PBMCs中GR启动子的使用和亚型的表达情况，并与人体其他细胞(HepG2，HK-2)进行对比。对PBMCs中GR各个第一外显子(exon1s)和亚型的相对表达量进行相关性分析。⑵使用RT-PCR及western-blot检测在GC刺激下，PBMCs中exon1A和GR表达的变化，再进一步使用Real-time PCR对GC刺激下PBMCs中GR exon1s和亚型的表达情况进行精确的测定。⑶使用Real-timePCR测定对激素反应性不同的INS患者GRexon1s和亚型的表达情况，并进行对比。western-blot检测两者病人GR蛋白表达上的差异。　　 结果：①在PBMCs、HepG2、HK-2三种细胞中，均表达GR exon1C，exon1B，GR-α，GR-P。而exon1A特异性表达于PBMCs中。PBMCs中GR功能性亚型GR-α的表达量和exon1C以及exon1A都有密切的相关，而另一亚型GR-P的表达和exon1B相关。②GC的刺激可以诱导PBMCs中GR及GR exon1A表达的上调，上调的GR亚型主要是由exon1A启动转录的GR-α。在不表达exon1A的HepG2细胞中，GC的刺激会诱导GR表达的下降。③在对激素反应性不同的INS患者中，存在不同的启动子使用方式，激素敏感的病人以GR exon1A为主，而激素抵抗的病人以exon1C为主，但两者在总的GR表达量上以及各个亚型的表达量上无明显差异。　　 结论：⑴GR的启动子使用方式有着组织的特异性。其中启动子1A只特异性的表达于PBMCs中。启动子1C是启动GR基础表达主要的启动子。不同启动子的使用和不同GR mRNA亚型的表达密切相关。在PBMCs中，GR-α的表达来源于启动子1A和1C启动的转录，而GR-P的表达来源于启动子1B的转录。⑵不同细胞对GC的刺激表现出不同的反应。在HepG2细胞中，GC的刺激会引起GR生理反馈性的下降。而在PBMCs中，GC的刺激会引起GR表达的增多，上调的GR主要为功能性亚型GR-α。这种效应有助于进一步扩大GC在PBMCs中的作用。启动子1A在GR的上调机制中起到重要的作用，因为上调的GR-α主要来源于启动子1A启动的转录。⑶INS患者对激素的反应性和GR的启动子使用方式有着密切的关系，但和启动子1A相关的GR自我上调无明显的联系。