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胃癌(gastric carcinoma,GC)是世界上最常见的癌症之一,尽管在过去的50年,发达国家的发病率与死亡率稳步下降,但是在全球范围内,胃癌仍是一个相当大的健康负担,包括中国在内的东亚地区胃癌的发病率最高,新发胃癌病例中,中国每年约占40%。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)是胃癌的主要危险因素,大约75%的胃癌病例是由幽门螺杆菌感染引起的。1994年,国际癌症研究机构(International Agency for Research on C ancer,IARC)将幽门螺杆菌归为导致人类胃癌的I类致癌物。幽门螺杆菌是一种革兰氏阴性菌,它定植于胃上皮细胞中,并存在于粘膜层,幽门螺杆菌感染能够引起宿主的炎症反应,导致慢性胃炎和消化性溃疡,最终可能发展成胃癌。研究发现,幽门螺杆菌感染可以促进许多促炎细胞因子的表达,如TNF-α IL-1β、IL-6和IL-8等,这些炎性因子可能在胃癌的发生发展中起关键作用。近年来,长链非编码RNA(longnon-conding RNA,lncRNA)的功能已被广泛认可,它通过调节染色质重塑,控制基因转录,转录后mRNA加工,蛋白质功能或定位以及细胞间信号传导来调节基因表达,有研究发现长非编码RNA可作为胃癌诊断和预后的潜在生物标志物。本实验室前期通过芯片技术筛选出了许多HP相关胃癌中的lncRNA,韩涛涛博士通过研究发现lncRNA-SNHG17能够通过716-720位的碱基序列AGGGA与NONO蛋白相互结合,并提出SNHG17的功能可能与基因组稳定性的调节相关。本研究旨在进一步探究SNHG17与NONO的结合及作用机制。为了在体外检测幽门螺杆菌(国际标准株以及从胃癌病人体内分离的临床菌株)感染是否引起正常胃粘膜上皮细胞及胃癌细胞中SNHG17的表达变化,本研究将新鲜收取的HP加入到细胞培养液中,进行qRT-PCR实验,结果发现,国际标准株和临床分离菌株的感染,均会使SNHG17的表达上调。本研究利用CRISPR/Cas9技术进行SNHG17与NONO结合位点突变胃癌细胞系的建立,最终成功获得两株纯合的结合位点突变的胃癌细胞。qRT-PCR实验结果显示,在SNHG17突变的胃癌细胞中,HP感染后,SNHG17和snoRNA的表达水平没有发生变化,即HP感染结合位点突变的胃癌细胞不影响SNHG17和snoRNA的表达。RIP实验显示结合位点突变的胃癌细胞,在HP感染后,NONO与SNHG17的结合受抑制。彗星实验显示,SNHG17突变的胃癌细胞感染HP后,彗尾变长,即DNA的损伤程度更严重。细胞免疫荧光实验显示,HP感染后,SNHG17突变胃癌细胞中γ-H2AX foci的形成增加,即DNA双链断裂(double strand break,DSB)的数量增加。Western Blot结果显示,SNHG17突变胃癌细胞中,γ-H2AX的表达量增加,同时Rad51的表达受到抑制,而Ku70和Ku80的量增加,由此推测γ-H2AX的表达量增加可能是因为NONO蛋白的募集量不足,导致了 DSB修复的延迟,体现为DSB的数量增加,而Rad51与Ku70/Ku80的变化可能也引起宿主细胞的DSB修复途径的变化。此外,本研究基于先前报道建立了一个慢性感染模型来模拟体内感染状态,通过全基因组测序来检测SNHG17对基因组重排的影响。我们测序发现SNHG17敲低后,胃癌细胞的拷贝数变异(CNV)减少,提示SNHG17的敲低有利于基因组的稳定。综合本研究的实验结果,我们推测SNHG17与HP感染引起的胃癌细胞基因组稳定性变化密切相关,为胃癌的诊断与治疗提供了新思路。