目的:原代分离及培养在位人体子宫内膜腺上皮及间质细胞，建立正常子宫内膜的体外模型。通过检测胰岛素和睾酮作用于子宫内膜细胞后血管紧张素受体的变化，以及AngⅡ和Ang-（1-7）作用于子宫内膜细胞后细胞增殖和凋亡的变化，探讨多囊卵巢综合征（PCOS）患者RAS的变化与子宫内膜发育的关系，以期为PCOS患者子宫内膜病理改变以及治疗提供新思路。方法:1通过酶消化、二次滤网过滤、差时贴壁等方法对30例正常在位子宫内膜组织进行分离培养，免疫细胞化学法鉴定细胞纯度，染色观察细胞形态，显微镜观察细胞生长状态及生长环境。2予以不同浓度的胰岛素（INS）（生理剂量10mIu/l,达PCOS剂量30mIu/l）、睾酮（T）(生理剂量10^-9mmol/ml,达PCOS剂量10^-5mmol/ml)刺激子宫内膜细胞24、48、72小时，MTT法检测INS、T对不同时间增殖期子宫内膜间质细胞生长的影响，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定INS、T对增殖期及分泌期子宫内膜间质细胞和腺上皮血管紧张素II（AngⅡ）的1型受体（AT₁R）、2型受体（AT₂R）、血管紧张素1-7（Ang-（1-7））的受体（MAS）mRNA的表达的影响。3予10^-12mol～/L10^-5mol/L浓度的AngⅡ、Ang-（1-7）分别作用于相同生长期的增殖期与分泌期子宫内膜间质细胞与腺上皮24、48及72小时，MTT法检测其OD值，观察其对于细胞增殖的影响。予10^-6mol/L的AngⅡ和Ang-（1-7）作用于增殖期间质细胞48小时，流式细胞技术检测其对于细胞增殖与凋亡的影响。结果:1原代子宫内膜细胞培养成功率为97%。间质细胞纯度为95%，有限传代，可存活一月。腺上皮纯度为90%，不易传代，可存活10天，传代时间短时，姬姆染色较HE染色效果要好。间质细胞随时间增殖，48小时增殖最快，增殖期细胞较分泌期细胞增长快。腺上皮24、48、72小时细胞数无明显变化。2胰岛素和睾酮刺激子宫内膜细胞后的变化2.1MTT法检测子宫内膜细胞的增殖，OD值显示：生理剂量，高剂量的INS均可促进增殖期间质细胞增殖，随胰岛素浓度的增加，胰岛素促进细胞生长的作用增强，与对照组相比均有显著性差异（P<0.05），且具有时间依赖性，48小时最强。不同浓度的睾酮均可抑制增殖期间质细胞生长，与对照组相比均有显著性差异（P<0.05），且具有时间依赖性，48小时抑制作用最强。2.2子宫内膜上AT₁R、 AT₂R、MASmRNA的表达子宫内膜上AT₁R、 AT₂RmRNA分泌期表达较增殖期强（P<0.05），主要存在于子宫内膜腺上皮（P<0.01）。MASmRNA在腺上皮细胞表达强于间质细胞（P<0.01），分泌期与增殖期表达差异无统计学意义（P>0.05）。生理剂量睾酮、胰岛素刺激后AT₁R、 AT₂R、MASmRNA与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05），而高剂量INS、T刺激后各期腺上皮和间质细胞上AT1R、 AT2R、MAS的表达均较对照组强，差异有统计学意义（P<0.05）。3AngⅡ、Ang-（1-7）对子宫内膜细胞增殖与凋亡的影响3.1MTT法检测OD值显示：小于生理剂量的AngⅡ对子宫内膜细胞增殖不发挥作用（P>0.05），生理剂量的AngⅡ促进增殖期和分泌期子宫内膜间质和腺上皮细胞生长，超生理剂量时抑制增殖期和分泌期子宫内膜间质和腺上皮细胞增长，随浓度的增加抑制作用增强，10^-6mol/L作用最强。随时间的增加，抑制作用也增加，48小时时抑制效果最强，有统计学意义（P<0.05）。小于生理剂量的Ang-（1-7）对子宫内膜细胞增殖不发挥作用，生理剂量的Ang-（1-7）抑制增殖期和分泌期子宫内膜间质和腺上皮细胞生长（P<0.05），超生理剂量时也抑制增殖期和分泌期子宫内膜间质和腺上皮细胞增长（P<0.01），随浓度的增加抑制作用增强，10^-6mol/L作用最强。随时间的增加，抑制作用也增加，48小时时抑制效果最强，差异有统计学意义（P<0.05）。3.2流式细胞学统计结果显示：10^-6mol/L浓度的AngⅡ与Ang（1-7）作用于增殖期间质细胞48小时，S期细胞百分比减少，对照组为8.586±1.420，AngⅡ刺激组为5.146±1.339，Ang-（1-7）刺激组为3.850±0.9702处于活跃的DNA合成期（S期）的细胞减少，细胞周期由S/G2-M向G0/G1期转变，抑制细胞增殖，Ang-（1-7）较AngⅡ抑制作用强，差异有统计学意义（P=0.028）。10-6mol/L的AngⅡ组、Ang-（1-7）组与对照组相比凋亡指数增加，对照组为0.4880±0.0747，AngⅡ刺激组为0.6980±0.0907Ang-（1-7）刺激组为1.282±0.3539，与对照组相比差异有统计学意义（P=0.018），Ang-（1-7）较AngⅡ的促凋亡作用强。10^-6mol/L的AngⅡ、Ang-（1-7）抑制增殖期间质细胞增殖，促进其凋亡，Ang-（1-7）较AngⅡ作用强。结论:1酶消化、二次滤网过滤、差时贴壁方法培养子宫内膜细胞省时，高效。间质细胞可有限传代，第2-3代细胞用于实验研究较好，腺上皮无法长久生长，生长3-4天的腺上皮为实验研究最好时期。内膜细胞的各种培养特性不随月经周期改变。2胰岛素促进子宫内膜细胞增殖，睾酮抑制子宫内膜细胞增殖。生理剂量的胰岛素和睾酮对子宫内膜血管紧张素受体不发挥作用，超生理剂量的胰岛素和睾酮可使子宫内膜上AT₁R、 AT₂R、MAS表达明显增强。3生理剂量的AngⅡ促进子宫内膜细胞生长，Ang-（1-7）抑制细胞生长，RAS的平衡可能有助于子宫内膜的正常发育。大剂量时均抑制子宫内膜细胞增殖促进细胞凋亡，可能参与了正常或PCOS子宫内膜的病理过程。