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目的:糖尿病肾病(Diabetic kidney disease,DKD)是糖尿病严重的慢性微血管并发症,以肾小球肥大、细胞外基质增多,小血管玻璃样变等为主要病理特点,临床特征以微量白蛋白尿到大量蛋白尿伴肾功能损害为主要表现。DKD是我国终末期肾脏疾病发生的第二位常见原因,也是西方国家终末期肾脏疾病需要透析治疗的主要原因。然而,DKD的发病机制复杂,尚不完全明确,目前的研究显示DKD是慢性低度炎症性疾病,Th1/Th2失衡等免疫因素在其发生发展中具有重要作用。2型固有淋巴细胞(type 2 innate lymphoid cell,ILC2)属于固有淋巴细胞家族,可以表达转录因子RORα和GATA3,能产生2类细胞因子(IL-4、IL-5、IL-9、IL-13),介导2型免疫应答,作为固有免疫和适应性免疫之间的桥梁,ILC2在炎症、组织的重塑及修复中发挥十分重要的作用。然而,目前ILC2在DKD的作用研究尚少,因此本实验通过对DKD患者外周血ILC2及其分泌的2类细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)的检测以及用这些细胞因子刺激体外培养的人近端肾小管上皮细胞来研究ILC2在DKD发病中的作用。方法:1.正常对照者(NC组)、2型糖尿病患者(DM组)、早期糖尿病肾病患者(DKD1组)、晚期糖尿病肾病患者(DKD2组)外周血单个核细胞(PBMC)中ILC2的比例通过流式细胞技术进行检测。2.NC组、DM组、DKD1组、DKD2组血浆IL-4、IL-5、IL-13的水平通过酶联免疫吸附实验(ELISA)法进行测定。3.细胞实验及分组:体外培养人近端肾小管上皮细胞,以IL-4、IL-13及高糖作为刺激因素,通过检测纤维化因子来体外模拟ILC2在糖尿病肾脏的作用。按如下所述分组:(1)正常对照组(normal control group,NC组):DMEM/F12培养基;(2)不同浓度IL-4组:1ng/ml IL-4组、10ng/ml IL-4组、100ng/ml IL-4组;(3)不同浓度IL-13组:1ng/ml IL-13组、10ng/ml IL-13组、100ng/ml IL-13组;(4)高糖组(high glucose group,HG组):含30mmol/L葡萄糖;(5)IL-4+高糖组(HG+IL-4组):100ng/ml IL-4+30mmol/L葡萄糖;(6)IL-13+高糖组(HG+IL-13组):1ng/ml IL-13+30mmol/L葡萄糖。细胞实验检测方法:(1)观察IL-4对体外培养人近端肾小管上皮细胞纤维化的作用:用不同浓度IL-4(1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml)刺激人近端肾小管上皮细胞不同时间(24h、48h),ELISA法检测细胞上清转化生长因子-β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)的水平,q-PCR检测TGF-β1和FN mRNA的表达。(2)观察IL-13对体外培养人近端肾小管上皮细胞纤维化的作用:用不同浓度IL-13(1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml)刺激人近端肾小管上皮细胞不同时间(24h、48h),ELISA法检测细胞上清TGF-β1和FN的水平,q-PCR检测TGF-β1和FN mRNA的表达。(3)观察IL-4、IL-13对高糖培养下人近端肾小管上皮细胞纤维化的作用:用IL-4(100ng/ml)、IL-13(1ng/ml)分别刺激高糖培养的人近端肾小管上皮细胞48h,ELISA法检测细胞上清TGF-β1和FN的水平,q-PCR检测TGF-β1和FN mRNA的表达。3.统计学分析:用均数±标准差(（?）±s)表示所有实验数据,数据均用统计软件SPSS 17.0进行分析,多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA),组间两两比较用LSD-t法,方差齐性检验用于组内比较,差异有统计学意义的界定为P<0.05。结果:1.与正常组相比较,DM组与DKD组外周血PBMC中ILC2比例显著升高,且DKD组升高比DM组更为显著,其中DKD2组又高于DKD1组(P﹤0.05)。2.DM组与DKD组血浆中细胞因子IL-4、IL-5及IL-13的水平较正常组明显升高,且DKD组升高比DM组更为显著,DKD2组高于DKD1组(P﹤0.05)。3.与正常组相比较,IL-4可呈浓度及时间依赖性促进体外培养人近端肾小管上皮细胞TGF-β1、FN的mRNA的表达(P﹤0.05)。4.与正常组相比,IL-13可以增强体外培养人近端肾小管上皮细胞FN和TGF-β1的表达(P﹤0.05)。5.与高糖组相比,IL-4+高糖组和IL-13+高糖组的FN、TGF-β1的表达均显著上调(P﹤0.05)。结论:1.糖尿病肾病患者外周血ILC2比例及其分泌的细胞因子IL-4、IL-5、IL-13水平增加,其中晚期肾病组高于早期肾病组,提示ILC2可能参与了糖尿病肾病的发生和发展。2.ILC2分泌的2类细胞因子IL-4、IL-13可增强体外培养人近端肾小管上皮细胞TGF-β1、FN的表达,且与高糖有协同作用,提示ILC2可能通过分泌细胞因子促进糖尿病肾病的肾脏纤维化。