目的:通过观察Cal27细胞增殖活性、迁徙能力及相关细胞因子表达的变化,探讨热疗对口腔鳞癌细胞Id-1表达水平的影响及机制。方法:1.Cal27细胞用含10%胎牛血清、1640培养基,在37℃、5%CO2培养箱中培养。用0.25%胰蛋白酶(含EDTA)消化收集Cal27细胞。用配置好的冻存液1ml将细胞冻存。采用倒置显微镜观察细胞的形态。2.采用CCK-8实验方法用450nm波长分别检测43℃热疗1小时后0h、2h、4h、8h、12h各时间点实验组与对照组细胞光密度值(OD),标记实验组与对照组细胞的生长曲线,运用t检验计算各时间点实验组与对照组差异是否具有统计学意义。3.采用划痕实验分别于43℃热疗1小时后的0h、6h、12h、24h时间点观察实验组与对照组细胞向中间迁徙情况,利用Image J软件计算迁徙的面积并绘制折线图,运用t检验计算各时间点实验组与对照组差异是否具有统计学意义。4.将实验组对数期生长的细胞置于43℃培养箱培养1小时后继续标准条件培养4小时后用于PCR实验。对照组不做任何处理。用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为c DNA,然后用Id-1和HSF1引物进行扩增,并以β-actin为内参,扩增体中加入实时荧光染料,进行实时荧光定量RT-PCR实验,检测热疗前后Cal27细胞中Id-1、HSF1的m RNA表达情况。结果:1.Cal27细胞形态:贴壁,呈多角形,核大,类圆形,核仁清晰可见,胞浆内可看到透亮度深浅不等的颗粒,细胞分裂相多见,并有多级核分裂,似铺路石样,密度过高时可重叠生长。2.CCK-8实验结果:热疗可以降低Cal27细胞活性,抑制细胞增殖。运用t检验分析其热疗后2h、4h、8h、12h的实验组与对照组数据,P值分别为P2=0.036,P4=0.007,P8=0.002,P12=0.001。2小时后观察实验组与对照组的细胞增殖活性差异具有统计学意义。3.划痕实验结果:热疗可以抑制Cal27细胞的迁徙能力,运用t检验分析其热疗后6h、12h、24h、48h实验组与对照组数据,P值分别为P6=0.028,P12=0.038,P24=0.012,P48=0.001,差异均具有统计学意义。4.q RT-PCR实验结果:热疗后Id-1的m RNA表达水平降低(P<0.05);热疗可以使HSF1的m RNA表达水平升高(P<0.05)。结论:本实验通过CCK-8实验和划痕实验数据结果证明热疗可以明显抑制Cal27细胞的增殖活性和迁徙能力。通过q RT-PCR实验方法,发现热疗可以明显降低Cal27细胞中Id-1的m RNA表达,升高HSF1的m RNA表达,提示热疗可能通过降低Id-1的表达水平影响细胞增殖和迁徙能力。