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目的葡萄膜炎是一类最常见的眼部自体免疫性疾病,其中多种类型具有反复发作、并发症多、治疗困难以及预后较差和致盲率较高等特点。间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)能够抑制多种免疫细胞(包括T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞以及树突状细胞)的增殖和功能。本研究采用MSCs治疗大鼠实验性自体免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveoretinitis, EAU),检测MSCs在患有葡萄膜炎的大鼠体内能否发挥免疫调节作用,以及其可能的作用机制,试图为临床治疗葡萄膜炎提供新的思路以及可供选择的治疗方法。方法1.原代培养Lewis或Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,达90%融合时传代培养。用流式细胞仪检测培养细胞的表型,并做体外诱导分化实验,以备后续实验使用。2.使用光感受器间维生素A类结合蛋白(interphotoreceptor retinoid-binding protein, IRBP)与含有结核杆菌H37RA的完全弗氏佐剂等体积混合,充分乳化后,在双后足部皮下免疫Lewis大鼠,24小时内经腹腔注射百日咳毒素,制作大鼠EAU动物模型。将动物随机分组,为了观察在免疫同时输注MSCs对EAU的预防作用以及MSCs对已经发生的EAU的治疗作用,从不同时间开始连续三天(免疫后0,1,2天,EAU发生前；免疫后第9,10,11天,EAU初发期；免疫后第12,13,14,EAU高峰期；及免疫后第16,17,18天,EAU慢性期)静脉输注自体或异体来源的间充质干细胞,空白对照组输注PBS。裂隙灯下定期进行临床观察,20天后进行病理学观察,参照Caspi分级对临床体征和病理学改变进行评分,观察葡萄膜炎的发生和转归情况。3.收集各组大鼠脾脏以及腹股沟淋巴结,分离单个核细胞,在IRBP刺激下孵育72小时后,采用BrdU试剂盒检测各组大鼠免疫应答强度。4.取IRBP刺激下各组大鼠脾脏和淋巴结单个核细胞孵育72小时后的上清液,采用ELISA试剂盒检测Thl类和Th2类细胞因子分泌情况。5.免疫20天后取大鼠外周血,流式细胞仪测定CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的百分比。6.收集各组大鼠脾脏以及淋巴结,分离单个核细胞,提取总RNA,采用RT-PCR测定FOXP3 mRNA表达水平。结果1.成功分离并鉴定MSCs。2.建立了EAU动物模型。3.采用MSCs治疗EAU,与对照组相比,免疫的同时、免疫后第9天及免疫后第12天给EAU大鼠输注MSCs后,临床症状均显著减轻(P<0.05),在免疫同时注射MSCs的预防效果尤为明显,而免疫后第16天,在疾病慢性期注射MSCs则无作用(P>0.05)。与临床表现一致,除外免疫后第16天注射MSCs组,病理学显示其他三组实验组大鼠视网膜结构损害明显较对照组轻(P<0.05)。4.体外和体内T细胞增殖实验表明,MSCs可以显著抑制致病性T细胞增殖(P<0.05)。5. ELISA结果显示,实验组Th1细胞因子分泌显著降低(P<0.05),而Th2细胞因子分泌升高(P<0.05),表明MSCs可以调节免疫应答平衡,导致Thl向Th2应答漂移。6.与对照组相比,MSCs治疗组大鼠体内调节性T细胞比例显著增高(P<0.05),实时定量PCR检测也发现FOXP3-mRNA在MSCs治疗组表达量显著高于对照组(P<0.05),这些结果表明MSCs可能通过上调调节性T细胞来发挥作用。结论MSCs可以通过抑制T细胞免疫应答、改变Th1/Th2应答平衡以及上调调节性T细胞,有效预防并治疗EAU。本研究证实了通过调节机体免疫系统,MSCs对免疫性疾病具有治疗作用。