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目的:茶多酚,葡萄柚提取物(Grapefruit-seed Extract,GSE)是近来研究较多的天然提取物,且作为天然防龋物质也备受关注。然而,两者在单组分使用时存在着各自的不足:为达到有效抑菌浓度的茶多酚溶液具有一定的苦涩感;前期临床研究发现GSE单独使用的抑菌效果仅与西吡氯铵相当,不如口泰漱口液。本研究拟探讨这两种天然物质配伍应用于防龋的可行性,即希望通过两物质的配伍应用达到降低单组分的使用剂量和副作用。龋病是细菌感染性疾病,变异链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)是口腔中公认的主要致龋菌之一,其致龋力与S.mutans的产酸、耐酸、黏附以及产胞外多糖的能力密切相关。因此,本文通过体外实验研究茶多酚-GSE混合液对S.mutans致龋力的影响,探讨两者配伍的最佳浓度及可能的防龋机制,为茶多酚-GSE混合液的临床应用提供实验依据。方法:1.茶多酚-GSE混合液对S.mutans生长、产酸的影响通过液体稀释法测定单组分茶多酚、GSE的最低抑制浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC)值,并采用棋盘稀释法测定茶多酚-GSE混合液对S.mutans的MIC值,通过计算分级抑制浓度(Fractional Inhibitory Concentration, FIC)指数来判定两者的联合效应;测定低于MIC值浓度的茶多酚-GSE混合液对S.mutans的△pH值,得出混合液对S.mutans产酸的影响。2.茶多酚-GSE混合液对S.mutans黏附能力的影响使用低于混合液MIC值4个浓度(即1/2、1/4、1/8、1/16 MIC)的混合液与S.mutans共同培养,计算S.mutans黏附率和黏附抑制率;并在扫描电镜下观察1/2 MIC混合液和空白组分别处理S.mutans后对玻片黏附的形态学特征。3 .茶多酚-GSE混合液对S.mutans产胞外多糖和葡糖基转移酶(Glucosyltransferase,GTF)的影响使用低于混合液MIC值4个浓度(即1/2、1/4、1/8、1/16 MIC)的混合液与S.mutans共同培养,收集上清液,分为2份。一份提取GTF,采用考马斯亮蓝法和Somogyi法分别测定总蛋白和还原糖含量,计算酶活力和比活力大小;另一份上清液采用蒽酮法测定胞外多糖含量。结果:1.抑菌、产酸实验茶多酚和GSE单独使用时,其MIC分别为2mg/ml和46.88mg/L,联用时可降低单组分的使用浓度,如茶多酚1mg/ml联用GSE 37.5mg/L即可达到联合应用的MIC,FIC=0.75;S.mutans培养前后的△pH值随混合液浓度的增加而明显降低,实验组各浓度组与对照组相比均有统计学差异(P<0.05)。2.黏附实验随着茶多酚-GSE混合液浓度的增加,混合液对S.mutans黏附率随浓度升高而下降,黏附抑制率逐渐升高,黏附抑制率的变化与混合液浓度之间呈剂量依赖正相关性;经统计学分析,实验组各浓度组与对照组相比均有统计学差异(P<0.05)。实验组各浓度组间也存在统计学差异(P<0.05)。扫描电镜图片显示:空白组与实验组相比细菌之间含有较明显的不定形团块状物质积聚。3.胞外多糖和GTF实验随着茶多酚-GSE混合液浓度的升高,S.mutans产水不溶性葡聚糖(Water-insoluble Glucann,WIG)、水溶性葡聚糖含量逐渐降低:与空白组对照,实验组只有最高浓度组产水溶性葡聚糖量有统计学差异(P<0.05),各实验组产WIG与对照组相比均有统计学差异(P<0.05)。随着茶多酚-GSE混合液浓度的升高,S.mutans的GTF活力及比活力逐渐降低,各实验组与对照组之间均有统计学差异(P<0.05)。结论:1.茶多酚-GSE混合液对S.mutans的体外抗菌活性具有相加作用,较各自的单组分在更低浓度即可有效抑制S.mutans生长;各浓度组均能抑制S.mutans产酸。2.茶多酚-GSE混合液可有效抑制S.mutans对玻片的黏附能力,扫描电镜结果推断其能通过抑制S.mutans WIG的合成从而减少蔗糖依赖性黏附作用。3.茶多酚-GSE混合液可有效抑制S.mutans产WIG及GTF活性,但对S.mutans产水溶性葡聚糖无明显抑制作用。