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目的:本研究旨在阐释补肾和脉颗粒改善老年自发性高血压大鼠（Spontaneous Hypertension Rat,SHR）肾损害的免疫调节作用,拟从机体免疫入手,探讨Th17/Treg细胞平衡与高血压肾损害的关系,证实补肾和脉颗粒通过调节Th17/Treg细胞平衡减轻老年SHR肾损害的假说,为补肾和脉颗粒改善老年高血压肾损害提供可靠的实验室依据。方法:一、临床研究部分:补肾和脉颗粒对肾气亏虚型老年高血压肾损害的疗效评价收集2019年10月至2021年10月就诊于山东中医药大学附属医院心内科和老年病科门诊的肾气亏虚型老年高血压肾损害患者信息,设置对照组（缬沙坦氨氯地平片）与观察组（缬沙坦氨氯地平片+补肾和脉颗粒）,两组均服药2月。通过观察两组患者治疗前后血压以及肾功能等指标的变化情况,并对比证候疗效评分,评价补肾和脉颗粒对肾气亏虚型老年高血压肾损害的临床效果。二、体内实验部分:实验一:补肾和脉颗粒对老年SHR血压和机体免疫的影响选用20只18月龄SPF级SHR,随机分为2组:模型对照组（SHR）、补肾和脉颗粒组（BSHM）,选用10只同龄SPF级Wistar-Kyoto大鼠,作为空白对照组（WKY）。BSHM组给予补肾和脉颗粒干预8周。定期记录体重、血压和尿生化指标,以评估补肾和脉颗粒的全身效应;肾脏超声检测肾脏动脉血流;HE染色和透射电镜,用于评估肾脏和脾脏的组织形态;Masson染色检测肾脏组织纤维化程度;ELISA法检测血清γ干扰素（Interferon-γ,IFN-γ）、白介素-4（Interleukin-4,IL-4）、白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、白介素-10（Interleukin-10,IL-10）和白介素-17A（Interleukin-17A,IL-17A）水平;免疫荧光染色观察脾脏孤儿受体-γt（orphan receptor-γt,RORγt）和叉头样转录因子p3（Fork-head transcription factor p3,Foxp3）的分布密度;流式细胞术检测外周血液中Th17和Treg细胞的数量、比例;利用转录组测序,筛选补肾和脉颗粒改善老年SHR肾损害的作用靶点。实验二:基于Th17/Treg细胞平衡探讨补肾和脉颗粒减轻老年SHR肾损害的作用机制选用60只18月龄SPF级SHR,随机分为6组:BSHM组（补肾和颗粒）、SHR组、BSHM+RORγt激动剂（SR0987,用于上调IL-17的表达）组（补肾和脉颗粒+7.14mg/kg SR0987,单次腹腔注射）、BSHM+硫氰酸钠（S6281,硫氰酸盐阴离子的主要来源,用于上调IL-10的表达）组（补肾和脉颗粒+4.4mg/kg S6281,1次腹腔注射/2d,共注射8周）、SR0987单用对照组（SR0987,7.14 mg/kg,单次腹腔注射）、S6281单用对照组（4.4mg/kg S6281,1次腹腔注射/2d,共注射8周）。选用10只同龄SPF级Wistar-Kyoto大鼠,作为空白对照组（WKY）。记录体重、血压和尿生化指标,以评估补肾和脉颗粒的全身效应;肾脏超声评估肾脏动脉血流;HE染色,用于观察肾脏和脾脏的组织形态;Masson染色,用于评估肾脏组织纤维化程度;ELISA法检测血清IL-6、IL-10和IL-17A,用于评估炎症水平;免疫荧光染色观察脾脏RORγt和Foxp3的分布密度;流式细胞术检测外周血液中Th17和Treg细胞的水平;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（quantificational Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR）检测IL-6、SMAD3、STAT3、核因子-κB（Nuclear Factor kappa-B,NF-κB）和转化生长因子-β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）的m RNA表达水平,蛋白免疫印迹（Western blot,WB）分析检测IL-6、SMAD3、STAT3、NF-κB和TGF-β1的蛋白表达水平。结果:一、临床研究部分:1.对照组（缬沙坦氨氯地平片）和观察组（缬沙坦氨氯地平片+补肾和脉颗粒）治疗2月后,两组患者在降低血压、改善肾功能和中医证候量化评分结果均显著优于首次就诊,差异有统计学意义（P＜0.01）。2.服药治疗2月后,观察组（缬沙坦氨氯地平片+补肾和脉颗粒）血压水平、肾功能状态和中医证候量化评分结果均明显优于对照组（缬沙坦氨氯地平片）,差异有统计学意义（P＜0.01）。二、体内实验部分:1.补肾和脉颗粒有效降低了老年SHR的收缩压和舒张压补肾和脉颗粒给药8周,老年SHR的收缩压降低了21.2 mm Hg、舒张压降低了8.8 mm Hg（P＜0.01）。2.补肾和脉颗粒改善了老年SHR的肾脏结构和肾功能补肾和脉颗粒降低SHR尿液中尿微量白蛋白（microalbumin,m ALB）、β2微球蛋白（Beta-2-microglobulin,β2-Mg）、N-乙酰-β-葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-glucosaminidase,NAG）水平（P＜0.01）;肾脏超声结果显示,补肾和脉颗粒显著改善肾脏动脉血流量和动脉硬化:收缩期峰值血流速度（Peak systolic blood flow Velocity,Vp）和平均血流速度（Mean blood flow velocity,Vm）（P＜0.01）,舒张期最小血流速度（Minimum diastolic blood flow Velocity,Vd）、阻力指数（Resistance Index,RI）和搏动指数（Pulsatility Index,PI）（P＜0.05）。HE染色和透射电镜结果显示,补肾和脉颗粒显著改善了肾脏的组织形态;肾脏Masson结果显示补肾和脉颗粒有效减少了肾脏纤维化程度（P＜0.01）。3.补肾和脉颗粒抑制炎症反应,调节Th17/Treg细胞平衡脾脏HE染色显示,补肾和脉颗粒改善了脾脏组织形态;ELISA法检测结果显示,补肾和脉颗粒显著提高了IL-10（P＜0.05）,降低了IL-6（P＜0.01）和IL-17A水平（P＜0.05）;SHR血清中IFN-γ虽有下降趋势,IL-4有上升趋势,但无统计学差异（P＞0.05）,提示补肾和脉颗粒更倾向于调控Th17/Treg细胞的分化和功能。免疫荧光显示补肾和脉颗粒明显提高脾脏Foxp3密度（P＜0.01）,降低脾脏RORγt密度（P＜0.01）,提示补肾和脉颗粒可能上调Treg细胞、同时下调Th17细胞的分化。流式细胞术结果显示,补肾和脉颗粒能够显著降低外周血Th17细胞数量（P＜0.01）,提高Treg细胞数量（P＜0.01）,证实补肾和脉颗粒有效上调了Treg细胞、同时下调了Th17细胞的分化。4.转录组测序筛选补肾和脉颗粒的药物靶点转录组测序筛选出补肾和脉颗粒干预导致的肾脏组织出现747个差异基因（m RNA）表达,其中有418个下调,329个上调（|fold change|＞2,P＜0.05）。GO分析提示,补肾和脉颗粒具有免疫调节作用。5.补肾和脉颗粒调节Th17/Treg细胞平衡的作用机制探讨补肾和脉颗粒能够明显降低老年SHR的血压,改善老年SHR的肾脏功能、血流量、动脉硬化、组织形态以及纤维化。补肾和脉颗粒给药同时联合应用S6281上调IL-10时,可见补肾和脉颗粒降压、改善肾功能的药效显著增强;补肾和脉颗粒给药同时联合应用SR0987上调IL-17时,观察到补肾和脉颗粒降压、改善肾功能的药效在一定程度上被抵消。q RT-PCR和WB结果提示,补肾和脉颗粒能够显著降低炎症因子IL-6、STAT3、TGF-β1、NF-κB和SMAD3的m RNA和蛋白表达;补肾和脉颗粒与S6281联合使用上调IL-10时,IL-6、STAT3、TGF-β1、NF-κB和SMAD3的m RNA和蛋白表达进一步下调（P＜0.01）;而补肾和脉颗粒与SR0987联合使用上调IL-17,补肾和脉颗粒下调IL-6、STAT3、TGF-β1、NF-κB和SMAD3 m RNA和蛋白表达的作用被抵消（P＜0.01）。结论:补肾和脉颗粒能够有效的降低肾气亏虚型老年高血压肾损害患者的血压水平,改善患者的肾功能和临床症状。补肾和脉颗粒通过增加老年SHR Treg细胞,降低Th17细胞,减轻肾脏炎症反应,进而起到改善肾脏组织结构、肾动脉血流及动脉硬化、肾脏组织纤维化,最终减轻老年SHR高血压肾损害的作用。