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蜱是一类专性吸血的体表寄生节肢动物,世界范围内普遍分布,其宿主种类繁多,是多种病原体的传播媒介,严重威胁着人类和动物的健康。除病原体外,蜱也会从自然环境和宿主血液中获得丰富的微生物,这些微生物不仅在宿主体内形成了稳定的群落结构,还在与宿主长期协同进化过程中,建立了复杂的种间生态关系。日本锐蜱(Argas japonicus)隶属于软蜱科(Argasidae)锐蜱属(Argas),主要在鸟类的体表寄生,我国仅在北京市、吉林省和辽宁省有该蜱分布的报道。2016年6月课题组在内蒙古自治区首次发现日本锐蜱,该蜱在当地居民家中大量出现,叮咬吸血并引起皮肤炎症,严重影响着当地居民的身体健康和日常生活。本研究以日本锐蜱为对象,运用高通量测序技术对若蜱和成蜱微生物16S rRNA基因测序并分析,较完整地揭示了日本锐蜱微生物群落信息。研究表明,日本锐蜱微生物群落组成丰富,微生物多样性丰度为雄蜱>若蜱>雌蜱。在门阶元上,共包含8个门的微生物,丰度最高的是变形菌门(Proteobacteria),其次为厚壁菌门(Firmicutes)和放线菌门(Actinobacteria)。在属阶元上,共包含107个属的微生物,丰度最高的是葡萄球菌属(Staphylococcus),其次为产碱菌属(Alcaligenes)和立克次体属(Rickettsia)。基于16S rRNA基因对立克次体进行系统发育分析,结果显示日本锐蜱中的立克次体是R.limoae和一种新的立克次体,将其命名为R-Aj(Rickettsia of A.japonicus)。构建日本锐蜱成蜱的细菌16S rRNA基因克隆文库,并进行限制性片段长度多态性分析。研究表明,雄蜱和雌蜱均含有的细菌为产碱菌、立克次体、葡萄球菌和假单胞菌(Pseudomonas),但在雄蜱中还检测到芽孢杆菌(Bacillus)、克雷伯氏菌(Klebsiella)和耶尔森氏菌(Yersinia),因此雄蜱细菌多样性较雌蜱丰富。序列比对结果显示,从基因克隆文库中筛选出的立克次体16S rRNA基因序列与高通量测序结果中R-Aj的序列一致,但未从基因克隆文库中检测到R.limoae。通过诊断PCR技术和多位点序列分析方法对日本锐蜱成蜱中R-Aj检测并鉴定。研究表明,R-Aj在雄蜱中的感染率为80.00%,在雌蜱中的感染率为56.67%。运用多位点序列分析方法,基于gltA、ompA和ompB基因构建R-Aj的单基因及多基因联合系统发育树,初步证实R-Aj是一种新的立克次体,并具有潜在的致病性。