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为了进一步了解对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,WSSV)蛋白VP37在病毒粘附过程中的作用,以电泳洗脱的方法将VP37回收并制备了其多克隆抗体。以原代培养的中国对虾血淋巴细胞作为基质,观察到了VP37多克隆抗体对WSSV与细胞结合的抑制作用。并且在微量滴定板上验证了VP37多克隆抗体对WSSV与细胞膜蛋白结合的抑制作用。实验证明,VP37的多克隆抗体对WSSV与细胞结合具有一定的抑制作用,表明VP37可能是WSSV的粘附蛋白(virus attachment protein)或其组成成分之一。以原代培养的对虾血淋巴细胞作为基质,通过酶联免疫吸附(Enzyme Linked Immunoserbent Assay,ELISA)试验对5株单克隆抗体:1A4,6A4,2B2,4A1,1D5的中和能力进行了筛选,确定了两种可以部分抑制WSSV与细胞结合的单克隆抗体,序号分别是2B2及1D5,其中2B2的中和效果好于1D5,其余3株未观察到中和效果。 通过对WSSV完整粒子的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶变性电泳(sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE),可以得到其高分子量蛋白图谱,从上可以观察到7条蛋白,分子量分别为:252.1,207.2,201.7,172.8,156.9,128.8,105.7Kd,并通过电泳图谱分析软件GelproAnalysis对它们的相对含量进行了分析,含量从高到低依次为252.1,105.7,128.8,201.7,207.2,172.8,156.9Kd。利用硝酸纤维素膜上的蛋白质印迹(Protein Blotting)及碱性磷酸酶的底物显色实验初步确定了在高分子量范围的两种可以和对虾鳃细胞膜蛋白结合的蛋白,分子量分别为157Kd和233Kd,揭示这两个蛋白可能是病毒结合蛋白的一部分。 以后工作可以对VP37进行蛋白质末端测序,进而从基因水平研究其在WSSV生命过程中的作用。目前实验结果显示,VP37的末端有封闭现象,需要对其进行处理才可测序。对粘附蛋白的最终确定需要经过体内中和实验,为此需要制备其抗体,通过个体水平体内中和实验来验证粘附蛋白的作用。