论文部分内容阅读
第一部分孕期不同HAART方案暴露对HIV感染母亲及HIV未感染新生儿的影响目的:了解孕期接受高效抗逆转录病毒治疗（HAART）方案预防HIV母婴传播的安全性和有效性，探讨两种不同HAART方案对妊娠结局、孕妇和胎儿造血及免疫功能的影响。方法:71名单胎妊娠HIV感染孕妇按照HAART方案的不同分为含齐多夫定（AZT）组40人、不含AZT组31人，以40名健康孕妇为对照组。HIV阳性孕妇自妊娠14周及14周以后开始抗病毒治疗，含AZT组的HAART方案为齐多夫定+拉米夫定（AZT+3TC）联合克力芝（LPV/r）或依非那仑（EFV）或奈韦拉平（NVP），不含AZT组的HAART方案为替诺福韦（TDF）+3TC联合LPV/r或EFV或NVP。采集开始抗病毒治疗时和分娩前孕妇肘静脉血、脐带血，进行血细胞参数测定和CD4+、CD8+T淋巴细胞测定，同时收集孕妇和新生儿基本信息进行分析，婴儿出生后4～6周及4个月进行HIV-1-DNA核酸测定。结果:1HAART治疗的两组孕妇当中，无妊娠期高血压疾病和妊娠期糖尿病的发生；HIV阳性母亲分娩新生儿无HIV感染发生，未观察到新生儿出生缺陷的发生，无死胎和死产发生。2三组均无新生儿重度窒息发生，轻度窒息发生率无显著差异（P＞0.05）。两HAART暴露组之间新生儿脐带血T淋巴细胞相关指标均无显著性差异（P＞0.05）。两HAART组出生体重低于对照组（P＜0.05）。三组低出生体重发生率分别为15.00%、16.13%、5.00%，两治疗组高于对照组（P＜0.05）。3含AZT组的中位治疗时间为20周，不含AZT组中位治疗时间为21周。两治疗组开始治疗时CD4+T淋巴细胞计数、CD4/CD8无差异；分娩前含AZT组孕妇CD4+T淋巴细胞计数560.32±226.10个/mm3，高于不含AZT组的483.38±246.50个/mm3，含AZT组CD4/CD8显著高于不含AZT组（P＜0.05）。分娩前含AZT组CD4+T淋巴细胞较开始治疗时均数上升了129.79个/mm3，升幅达30.15%，CD4/CD8升高，CD8+T淋巴细胞均数降低415.97个/mm3，降幅为29.57%，P＜0.05；而不含AZT组上述指标虽有改变但没有统计学意义。4分娩前含AZT组与正常对照组相比，RBC、Hb、HCT、N显著降低，MCV、MCH、RDW显著增高（P＜0.05）；两HAART组相比，含AZT组RBC降低、L显著降低，MCV、MCH、RDW显著增高（P＜0.05）；各组间WBC和PLT没有统计学差异。三组孕妇轻度贫血的发生率没有统计学差异（P＞0.05），含AZT组孕妇中度贫血发生率高于其他两组（P＜0.05）。5新生儿脐带血含AZT组较对照组RBC、Hb、HCT、N显著降低，MCV、MCH、RDW、L、PLT显著增高（P＜0.05）；两HAART组相比，含AZT组RBC、Hb、HCT显著降低，但MCV、RDW显著增高（P＜0.05）；各组间WBC没有统计学差异。HAART暴露的两组轻度贫血发生率较对照组高（P＜0.05）；含AZT组新生儿轻度、中度贫血较不含AZT组更多见（P＜0.05）。结论：1、长疗程HAART治疗后，HIV母婴传播率接近为零，孕期HAART治疗安全、有效；2、孕期采用长疗程含AZT的HAART方案有助于孕妇的免疫重建；3、孕期含AZT的HAART暴露导致孕妇及新生儿巨幼红细胞性贫血和中性粒细胞减少，新生儿血小板增多。第二部分妊娠期齐多夫定干预对子代造血干/祖细胞抑制效应的研究目的：系统观察和阐明齐多夫定对新生儿、新生鼠造血干/祖细胞活性抑制效应的变化规律。方法：针对齐多夫定干预造血干/祖细胞活性的影响，进行三方面研究：1在临床研究方面，HAART暴露的新生儿脐血分离单个核细胞，流式细胞术检测CD34+细胞比例，培养粒单系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(BFU-E)以及巨核系祖细胞(CFU-Meg)并计算克隆形成集落数；2细胞学层次研究：取脐血造血干/祖细胞、新生小鼠骨髓单个核细胞，在CFU-GM、BFU-E和CFU-Meg体系和造血干/祖细胞悬浮培养体系中，进行体外AZT干预，浓度分别为0.1μM、0.5μM、1.0μM、2.0μM、4.0μM，观察与计算成集落数，流式细胞术检测干预后脐血造血干/祖细胞、小鼠骨髓单个核细胞的凋亡率；3Balb/c孕小鼠宫内暴露，AZT剂量为5.0mg/日/只和10.0mg/日/只，干预时间为孕期第10天至分娩，检测新生鼠CFU-GM、BFU-E和CFU-Meg成集落数。结果：临床15例HAART暴露脐血单个核细胞中，CD34+细胞阳性率为22.6±9.6%以及CFU-GM、 BFU-E和CFU-Meg成集落数显著低于正常脐血水平；在体外AZT干预体系中，新生鼠骨髓单个核细胞和脐血造血干/祖细胞，在0.5μM以上浓度，CFU-GM、BFU-E和CFU-Meg成集落数显著降低，且凋亡率明显升高，而在0.1μM浓度，凋亡率变化不明显，CFU-GM成集落数明显降低，但BFU-E和CFU-Meg成集落数只有降低趋势。在不同剂量AZT宫内暴露新生小鼠骨髓单个核细胞，CFU-GM、BFU-E和CFU-Meg成集落数明显低于正常对照新生小鼠。结论：妊娠期齐多夫定对造血干/祖细胞活性表现为明显的抑制效应，造血干/祖细胞凋亡，估计与齐多夫定线粒体毒性有关。第三部分齐多夫定干预对子代造血干细胞自我更新信号通路调控的实验研究目的：探索齐多夫定（AZT）对造血干细胞自我更新相关信号通路PI3K/Akt/mTOR和相关分子Bmi-1的变化规律，明确其对造血干细胞影响的分子机制。方法：Balb/c孕小鼠AZT干预，AZT剂量分别为5.0mg/日/只和10.0mg/日/只，暴露时间为孕期第10天至分娩；取新生鼠骨髓细胞，Ficoll分离后，采用qRT-PCR与Western blot方法检测PI3K/Akt/mTOR和相关分子Bmi-1、PTEN的表达水平变化。对照组分别为正常新生鼠与成体小鼠和老年小鼠。结果：宫内AZT暴露的新生小鼠的PI3K/Akt/mTOR信号通路中，mTOR水平表达有升高趋势，与成体小鼠无明显区别，但明显低于老年小鼠，而PTEN基因的表达无显著变化；Bmi-1基因表达水平有较正常对照新生鼠和成体小鼠高，但明显低于老年对照小鼠。AZT宫内暴露新生小鼠P70S6、4EBP1D较正常新生小鼠升高但低于老年小鼠（P <0.05），老年小鼠上述蛋白表达低于成年小鼠（P <0.05）。结论：AZT对新生鼠造血干细胞自我更新相关信号通路关键分子mTOR与Bmi-1存在有限影响，仍可维持在较为正常调控水平范畴。