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番茄(LycopersiconesclulantumMill)是重要的蔬菜和经济作物，在世界范围内广泛栽培。番茄病毒病使番茄的产量下降和品质降低，造成严重的经济损失。番茄花叶病毒(Tomatomosaicvirus，ToMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus，CMV)是两种侵染我国番茄的主要病毒，在全国各地均有发生。本研究的主要目的是建立以植物组织内的18SrRNA为内参照的多重RT-PCR体系同时检测这两种病毒，通过特异性引物的设计区分侵染番茄的ToMV和烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus，TMV)，区分CMV亚组Ⅰ和亚组Ⅱ，以及检测CMV携带的卫星RNA(satRNA)，为番茄流行病毒病的调查和检验检疫部门等提供技术支持。
为了建立多重RT-PCR体系，本研究利用待检目的片断的cDNA克隆为模板，首先建立多重PCR体系，利用多重PCR体系评价引物的特异性和获得多重RT-PCR体系的基本反应条件。以混合的各感病番茄叶片为材料提取总RNA,进行逆转录(reversetranscription，RT)反应，以RT产物为模板进行多重RT-PCR体系的优化条件试验，建立多重RT-PCR体系。实验结果表明，以cDNA克隆为模板的多重PCR体系的反应条件适合于以RT产物为模板的多重RT-PCR体系。与常规的多重RT-PCR体系的建立过程相比，本方法可以对模板浓度加以调节和控制，从而快速的建立多重RT-PCR体系。经过优化的多重RT-PCR体系的反应条件为：10μL逆转录反应体系中各组份的含量为0.4μLCMVⅡR，0.1μLCMVⅠR，0.6μLTMV(ToMV)R，0.1μLsatRNAR，2μL(4～5μg)总RNA，0.25μLRNaseInhibitor(40U/μL)，2μLdNTP(2.5mM)，2μL5×AMVbuffer，0.25μLAMVReverseTranscriptase(5U/μl)；25μL的多重PCR体系中各组份的含量为2.5μL10XPCRbuffer(Mg2+)，2μLdNTP(2.5mMeach)，0.5μLMg2+(25mM)，0.4μLTaq聚合酶(5U/μL)，1μLRT产物，0.75pLCMVⅡF/R，0.125μL，CMVⅠF/R，0.5μLTMVF/R，0.125μLsatRNAF/R，0.125μL18SrRNAF/R。
本研究利用建立的多重RT-PCR体系对田间的番茄样品进行检测，对30个样品进行了单一RT-PCR检测。结果表明，在检测ToMV和CMV时，多重RT-PCR体系和单一RT-PCR有一致的检测结果，而在检测satRNA时，多重RT-PCR体系的检测结果常有不明显的非特异性扩增条带，可靠性较低。在54份样品中，检测到CMV的有38个,ToMV的有12个，其中包括CMVS-Ⅰ和CMVS-Ⅱ复合侵染的2个样品，CMVS-Ⅱ和ToMV复合侵染的3个样品及CMVS-Ⅰ和ToMV复合侵染的4个样品。
本研究还以CMV-Fny,CMV-CB7和CMV-LS作为参照按照Chen建立的方法对检测到的CMV基因组进行酶切分析。结果表明，对于检测到的CMV,其三条基因组最常见的酶切图谱分别与CMV-FnyR1，CMV-FnyR2和CMV-CB7R3的酶切图谱相似。这与报道的图谱类型有明显差异，要确定其是否为一种新的图谱类型或者是CMV亚组Ⅰ内的假重组体，还需要进一步的研究。