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研究背景 膀胱移行细胞癌(BTCC)是泌尿系统常见的恶性肿瘤。约有10～15％BTCC可发展浸润至肌层，浸润肌层的肿瘤转移的风险很大，而且易复发。像所有实性恶性肿瘤一样，膀胱肿瘤的生长和转移需要有新的血管生成，血管生成是膀胱肿瘤发生的基本环节。研究膀胱肿瘤的血管生成有重要理论价值和现实意义。 肿瘤的血管生成主要取决于微环境中血管生成诱导因子与抑制因子之间的平衡。肿瘤细胞在发展过程中通过改变微环境中血管生成诱导因子和抑制因子的水平而获得血管生成的能力；同时，这些因子分泌水平又受其他如缺氧、癌基因的激活、抑癌基因的失活等因素的调控。 血管内皮生长因子(VEGF)是一种糖基化的多功能细胞素，对内皮细胞有一系列重要的生物作用，可以诱导内皮细胞增殖，增强血管的通透性，是一种很强的血管生成诱导因子。血小板反应素-1(TSP-1)是一种分子量为450kd的细胞外基质糖蛋白，在体内体外实验中具有抑制血管生成的活性。它参与调节细胞增殖、细胞活力、细胞支架形成、炎症和伤口愈合，以及细胞的分化。环氧化酶-2(COX-2)是花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，在细胞因子、生长因子、促癌因子等多种因素刺激下合成增加，可影响细胞粘附、增殖、凋亡和分化等有关的信号传导通路。研究表明，VEGF、TSP-1、COX-2都与肿瘤的生长及血管生成有关系，但作用机制还不明确。 本研究从肿瘤组织学和细胞学两方面，应用免疫组化和原位杂交技术，检测VEGF、TSP-1、COX-2在正常膀胱粘膜、BTCC及人膀胱癌T24细胞中的表达，研究它们的相互关系及与肿瘤的发展和血管形成的关系。中南大学博士学位论文 中文摘要目的： 研究膀眈移行细胞癌及人膀肤癌T24细胞中VEGF、TSP－1、COX正的表达及其与肿瘤分级、分期和复发的关系，探讨VEGF、TSP－l、COX－2在肿瘤血管形成过程中的相互关系及肿瘤新的血管生成的分子机制。方法： 1．采用免疫组化法（ABC法）及原位核酸分子杂交技术，对 48例 BTCC和 10 例正常膀既粘膜中VEGF、TSP－l、COX－2表达进行检测，应用免疫组化法 检测BTCC中F－Vlll相关抗原的表达，计算微血管密度，结合临床资料分 析各种指标在BTCC发生发展中的作用及相互关系 二．细胞学研究：1）细胞活力分析 T24细胞用不同浓度celecoxib作用4小时； 用含或不含 5 u M celecoxib的培养基孵育 24小时并于各时间段收获细 胞。然后用胎盘蓝染色，计算活细胞数；2）用含或不含suM celecoxib 的培养基培养24小时，检狈处理前后VEGF、TSP－1、COX－2的表达。结果：1．MVD均值随BTCC的分级、分期的增高而增高，高分化、浅表性、无复发 组MV D均值低于低分化、浸润性、复发组（P＜0．05）；2．BTCC中VEGF表达较正常组高（P—0．002），浸润组VEGF表达高于浅表组， （P＝0刀10），复发组与未复发组间有显著性差异（P＝0刀11）；3．BTCC中 COX上 表达高于正常组①＜0．00），并随肿瘤分级、分期增 高而增高，低分化、浸润性、复发组COX－ZmANA表达高于高分化、浅表性、 未复发组舒对．05）；4．BTCC中TSPI表达阳性率低于正常组0二0刀00），并随肿瘤分级、分期升 高而降低，低分化、浸润性、复发组TSP－l阳性率低于高分化、浅表性、无 复发组0＜0仍）；5．BTCC中，TSP－l表达低，VEGF表达高，MVD均值也高，VEGF表达低， TSP上表达高的肿瘤，MVD均值较低，中度表达VEGF的BTCC中，TSP 低表达组MV D值高于＊SP高表达组（P＜O．05）。＊＊GF与＊S卜1表达呈负相 关。（fs—0．323 P二0刀25） 6．BTCC 中COX－2 表达与VEGF、TSP上 表达无显著性相关（rs一0＊ P＝0．254，fs＝0刀97 P＝0．513） 7．10 u M celecoxib处理 4小时，T24细胞活力下降约为 52．7O，浓度增加， 细胞活力进一步下降；用 5 u M celecoxib处理 24小时，4、吕、16、24 ’J’ 时时细胞活力分别为 83．6o、52．3o、39．5O、32．2O，说明 celeco油可使T24 细胞活力下降并呈时间、剂量依赖反应。 8．celecoxib处理前，T24细胞VEGF、COX上表达阳性，TSPI表达阴性； Ill 中南大学博士学位论文 中文摘要 celecoxib处理后，T24细胞COX一二表达阳性，VEGF、TSP－1表达阴性。 结论： 1．MVD值及VEGF、COX．ZmRNA的表达水平可作判断BTCC生物学行为的 有用指标。检测多个指标，有助于我们更准确地判断膀味癌的进展和预后。 2．TSP上随BTCC分级分期增高而表达下降，并与肿瘤复发有关，可作为判断 分级分期，检测复发的指标。 3．BTCC中VEGF与TSP－1表达呈负相关，VEGF表达上调，TSP－l表达下降 可能是肿瘤新血管生成的重要原因。 4．COX《选择性抑制剂celecoxib可使T24细胞活力下降?