脂滴由中性脂质构成核心，外层由单层磷脂膜包被，在单层磷脂膜上镶嵌着许多脂滴蛋白。它存在于几乎所有物种当中。随着研究的不断深入，人们认识到脂滴除了储存中性脂质外，还具有许多其他的生理功能，如:脂质代谢、运输、与其他细胞器发生相互作用等。脂滴生理功能的研究有助于解释许多代谢疾病的生理机制，如:肥胖病，脂肪肝，动脉粥样硬化等。而且，在原核生物中，脂滴作为中性脂质的主要储存场所，能够为生物柴油提供原料。脂滴的众多生理功能离不开脂滴表面的主要蛋白。本文以原核生物Rhodococcus jostiiRHA1(R.jostii RHA1)和小鼠肝脏中的脂滴作为研究对象，用蛋白质组学，基因敲除，GFP荧光定位等方法分析了脂滴主要蛋白的定位及功能。　　 我们成功地将原核生物R.jostii RHA1的脂滴纯化，并通过胰酶处理消化掉脂滴蛋白暴露在外面的亲水肽段后，得到与脂滴的单层磷脂膜和中性脂质紧密结合的亲脂肽段，并对这些亲脂肽段进行蛋白质组学分析。我们发现，这一方法成功地富集了亲脂肽段。而且这些肽段的蛋白大部分是脂滴蛋白，例如，肽段数最高的蛋白Ro01408，被鉴定是脂滴上的主要蛋白。　　 结合R.jostii RHA1脂滴蛋白质组学的分析，我们选取了它的相近物种Rhodococcus opacus PD630(R.opacus PD630)上的LPD03923,LPD06328,LPD02840，LPD02496基因，并选取了R.jostii RHA1上的ro06200基因通过构建融合蛋白分析其定位，我们发现LPD03923，LPD06328和Ro06200密集地分布在脂滴的周围。我们还选取了ro06190，ro04894，ro02258基因，通过同源重组敲除的方法研究其功能，发现ro06190影响了脂滴中性脂质的含量，ro04894影响了脂滴的大小。　　 在对原核生物脂滴蛋白定位肽段进行分析的同时，我们也选取了小鼠作为真核生物的代表。小鼠肝脏的脂滴较易获得，而且，小鼠作为代谢疾病的主要模式生物，其肝脏脂滴的研究能够为人类许多脂类代谢疾病提供研究基础。我们富集了小鼠肝脏脂滴的定位肽段，得到了脂滴单层磷脂膜上结合紧密的片段，并通过蛋白质组学分析了这些肽段的序列。　　 肝脏作为生物体内脂滴含量丰富的器官，里面的脂滴根据其中性脂质的不同，可以分为不同种类。这些不同种类的脂滴的主要蛋白也有很大差异。我们通过不同的离心速度和离心时间，首次在小鼠肝脏中成功分离了富含甘油三酯和富含胆固醇酯的脂滴，并分析了其蛋白谱和脂滴大小差异，发现这两种脂滴在高分子量的蛋白谱上有较大差异，而且富含甘油三酯的脂滴较小，脂滴蛋白上所带有的其他细胞器的标记蛋白也较少。　　 综上所述，本文分别选取R.jostii RHA1的脂滴和小鼠肝脏的脂滴作为研究对象，对脂滴主要蛋白的定位及功能做了研究。在原核生物中，通过蛋白质组学分析了与脂滴紧密结合的亲脂肽段，得到了这些亲脂肽段的序列，为脂滴定位共性的分析提供了研究基础。同时，我们对脂滴主要蛋白进行了定位和功能的分析，发现LPD03923，LPD06328和Ro06200能够聚集地分布在脂滴表面，Ro06190，Ro04894对脂滴的甘油三酯含量和脂滴大小有影响。在小鼠中，通过蛋白质组学分析了肝脏脂滴上的亲脂肽段，为脂滴定位特性的研究提供了数据库。同时，我们也分离了小鼠肝脏中不同组分的脂滴，发现了这些不同组分脂滴上的不同蛋白。这对肝脏相关的代谢疾病的研究有一定意义。