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野生型变铅青链霉菌66通常不产生蓝色的放线紫红素(Actinorhodin),变铅青链霉菌66的利福平抗性突变株在R4平板上产生了放线紫红素。我们在含利福平(200ug/ml)的GYM抗性筛选平板上筛选到了在R4平板上具有产生放线紫红素表型(Act~+)的利福平抗性突变株。从利福平的抗性株中获得Act~+的机率理论上是100%。此类突变株DNA序列分析结果表明,其rpoB基因(编码RNA聚合酶β亚单位)的利福平敏感域存在有点突变。变铅青链霉菌rpoB基因置换实验证明,正是rpoB基因点突变激活了蓝色放线紫红素的生物合成。 为确定ppGpp在变铅青链霉菌抗生素产生启动过程中的作用,我们筛选变铅青链霉菌的relC松弛突变株(被认为失去了积累ppGpp的能力)。我们从硫链丝菌素抗性(tsp~R)突变株中筛选得到一个relC松弛突变株50—11。DNA序列分析发现,在50—11菌株的编码核糖体L11蛋白的rplK基因N末端区有6bp缺失。50—11菌株的生长受到明显的损伤,它的孢子形成的启动被推迟。在tsp~R突变株中获得relC突变株的机率是3.8%。以relC松弛突变株为亲株,筛选Act~+利福平抗性突变株(rif~R relC)。对7个rif~R relC突变株DNA序列分析结果表明在rpoB基因的利福平敏感域中存在点突变。我们考察了在氨基酸缺乏时野生型,rif~R突变株,relC以及rif~R relC突变株的ppGpp积累能力。rel~+菌株(wildtype,rif mutant)快速产生大量的ppGpp。rel突变株(rif and relC rif mutant)几乎失去积ppGpp能力。我们推断rif突变株生物合成放线紫红素能力的激活可能与ppGpp无关。 从变铅青链霉菌野生型中筛选获得的rif54(rif)突变株在R4平板上培养能产生大量蓝色的放线紫红素,其生长速度明显降低,菌落变小;形态分化延迟,产孢能力明显低,孢子颜色发生了变化。序列分析证明在rif54的rpoB基因上具有一个点突变。在不含利福平的GYM平板上多次传代后,rif54(rif)表型发生了明显的变化。rif54单菌落分离,我们发现一些菌落能产生大量蓝色的放线紫红素,但生长和产孢能力则恢复到接近野生型的水平。对其中两个菌株rif54—1和rif54—2的DNA序列分析表明,在rpoB基因中靠近原来突变位点沈阳药科大学博士学位论文 摘 要附近自发产生了第二个点突变。对野生型,rif单突变株,rif双突变株的液体培养和固体培养进行了细致的考察,发现呻双突变株解除了第一个突变所造成的对菌株生长和产泡能力的损伤,具有抗生素产生能力,同时并没有失去利福平的抗性。叩OB基因置换实验证明正是这自发产生的第二个点突变造成了菌株生长和产抱能力的恢复。双向凝胶电泳c-D PAGE)对对野生型,rif单突变株,rij双突变株总蛋白的分析结果说明在他们之间存在着明显差异。 在硝砒咯假单胞菌中引入氨基糖贰类抗生素抗性突变以提高硝砒咯菌素的生产能力。分别筋选了链霉素,潮霉素,GENETICIN和庆大霉素的抗性突变株。筛选抗生素的抗性突变株,生物测定抗性突变株的抗菌素生产能力,在这4氨基糖苦类抗生素中,链霉素抗性突变株提高硝砒咯菌素的产生能力的效果最好。GENETICIN和庆大霉素的MIC比较低,但它们的抗性突变对提高抗生素生产能力的效果较低。潮霉素对提高抗生素生产能力也具有一定的效果。