论文部分内容阅读
本文以常用中药材丁香花蕾作为原材料,应用多种分离和检测手段,探究用95%乙醇浸提后的丁香花蕾浸膏中所含物质,在分离物质的同时采用最低抑菌浓度法(MIC),根据极性及组成的差异分组进行对香蕉枯萎病病菌、芒果炭疽病病菌耐药菌株及芒果炭疽病病菌敏感菌株抑菌活性检测。再结合减压液相色谱法(VLC)、加压制备色谱及常规制备色谱法,多次反复过柱纯化可能有抑菌活性的成分,并鉴定其结构。得到成分已知的物质时,运用生长速率法及MIC法对已知物进行抑菌活性检测。主要结果如下:
1.初步抑菌试验检测:通过减压液色谱法,对丁香花蕾浸膏用16个梯度极性溶剂进行洗脱,得到挥发油及Ⅰ~Ⅵ号固体样品对香蕉枯萎病病菌、芒果炭疽病病菌耐药菌株及芒果炭疽病病菌敏感菌株抑菌活性检测发现,低极性成分具有很好的抑菌活性。其中挥发油的MIC值低于1.2mg/ml。另外的粉状样品的MIC值介于1~10mg/ml。
2.丁香浸膏中低极性成分的分离与纯化:丁香花蕾浸膏通过多次反复柱层析,得到纯化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。其中Ⅱ、Ⅲ因结构相似而共同存在。结构鉴定结果表明Ⅰ为丁香酚,Ⅱ为丁香酚酯,Ⅲ为齐墩果酸。通过气质联用仪(GC-MS)对馏分A、B和C进行分析,通过比对质谱图发现馏分A中主成分为丁香酚88.9%,丁香酚酯7.3%,馏分B中的主成分为丁香酚53.5%,丁香酚酯32.5%,馏分C中丁香酚为79.2%。
3.纯化合物抑菌试验检测:通过生长速率法研究齐墩果酸对芒果炭疽病病菌耐药菌株及芒果炭疽病病菌敏感菌株抑菌活性,结果发现齐墩果酸在浓度为5mg/ml时对芒果炭疽病病菌耐药菌株的抑制率为36.2%,对芒果炭疽病病菌敏感菌株的抑制率为-6.4%,说明对其生长有一定的促进作用。
4.挥发油的抑菌试验检测:挥发油根据从层析柱中洗脱下来的先后顺序分成三段进行研究,分别为馏分A、B及C。通过生长速率法分别用馏分A、B及C对芒果炭疽病病菌耐药菌株及芒果炭疽病病菌敏感菌株抑菌活性进行检测,发现馏分A浓度为0.5mg/ml时对两种病菌的抑制率达到100%;馏分B浓度为0.5mg/ml时对耐药株及敏感株的抑制率分别达到44.7%及36.2%;馏分C浓度为0.5mg/ml时对两者的抑制率分别达到97.9%及100%;发现挥发油活性强弱与丁香酚的含量成正比,同时也说明丁香酚酯对芒果炭疽病菌并无抑菌活性。