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骨骼肌是一高度可塑性器官,对运动和饮食等因素可产生适应性改变。研究表明运动训练可导致肌肉肥大、骨骼肌纤维类型的转化等。钙调神经磷酸酶被认为是参与运动诱导的骨骼肌适应的重要信号通路。已有的一些研究表明钙调神经磷酸酶不仅参与了运动诱导的肌纤维转换,而且还可能参与了肌纤维肥大。另一方面,骨骼肌大小不仅与蛋白合成有关,而且也与蛋白分解有关。FoxO1/MAFbx/MuRF1是调节骨骼肌蛋白分解的重要信号通路。进一步探讨钙调神经磷酸酶信号通路与 FoxO通路之间的关系无疑对了解骨骼肌的适应机制具有一定意义。 目的:本研究通过对大鼠骨骼肌L6细胞用环孢素A抑制其钙调神经磷酸酶的活性,观察环孢素A对FoxO1/MAFbx/MuRF1信号通路的影响,探讨钙调神经磷酸酶是否影响骨骼肌萎缩信号传导通路。 研究方法:L6细胞分化8天后,随机分为四组:对照组,咖啡因组,环孢素A组,咖啡因加环孢素A组。刺激5小时后,分别提取各组蛋白质和核酸,进一步纯化后用于Western blotting检测胞浆胞核FoxO1蛋白含量和荧光定量PCR实验检测FoxO1、MAFbx、MuRF1各基因表达。 研究结果:1.荧光定量PCR实验结果显示:与对照组比较,咖啡因组的各基因表达均上调,其中FoxO1上调了2.19倍,MAFbx上调了3.23倍,MuRF1上调了2.99倍(P?0.05);环孢素A组各基因表达与对照组均无明显差异;环孢素A加咖啡因组的各基因表达均上调,其中FoxO1上调了2.22倍,MAFbx上调了3.14倍,MuRF1上调了3.08倍(P?0.05)。 2. Western blotting实验结果显示:咖啡因组,环孢素A组,环孢素A加咖啡因各组胞浆和胞核 FoxO1蛋白表达明显高于对照组;环孢素A组和环孢素A加咖啡因组胞浆FoxO1蛋白表达还明显高于咖啡因组;环孢素A加咖啡因组胞核FoxO1蛋白表达还明显高于咖啡因组和环孢素A组。 结论:1.咖啡因上调FoxO1/MAFbx/MuRF1各基因的表达并增加FoxO1蛋白含量。 2.钙调神经磷酸酶不影响FoxO1/MAFbx/MuRF1的基因表达。