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背景：冷冻消融技术逐渐发展成为局限性前列腺癌的一线治疗手段，冷冻免疫反应研究将冷冻消融局部治疗与全身免疫治疗有机结合起来，为肿瘤综合治疗提供理论和实验依据。目的：评价冷冻消融治疗前列腺癌移植瘤后对机体抗肿瘤免疫状态的影响，探讨冷冻消融联合GM-CSF制作体内原位肿瘤疫苗的可行性与有效性。材料与方法：复制RM-1细胞激素非依赖性前列腺癌肺转移模型，将动物随机分为对照组、手术切除组、冷冻治疗组、GM-CSF治疗组、冷冻+GM-CSF治疗组。利用Endocare公司氩氦冷冻系统直径2mm冷冻针行皮下移植瘤冷冻消融治疗。HE染色观察肿瘤引流淋巴结和肺转移发生率；免疫组织化学、流式细胞术评价肿瘤局部、引流淋巴结、脾脏DC的数量及活化比例；ELISPOT法检测引流淋巴结、脾脏CD4+T细胞肿瘤特异性IFN-γ分泌情况；LDH法检测引流淋巴结、脾脏CD8+CTL细胞肿瘤杀伤活性；ELISA法检测外周血IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10水平，以IFN-γ/IL-4计算Th1/Th2。结果：(1)冷冻消融术前、术后7天、术后14天、术后21天外周血Th1/Th2比值分别为6．24±0．58、9．30±0．73、13．71±0．57、10．31±0．30(P＜0．05)；(2)冷冻消融术前、术后7天、术后14天、术后21天，肿瘤引流淋巴结CD4+T细胞由前列腺癌细胞刺激后IFN-γ分泌阳性细胞数每10~6T细胞分别为23．2±1．48、243．4±46．21、95．8±6．83、25．2±1．64(P＜0．05)，而肾癌细胞刺激后IFN-γ分泌无变化。脾脏CD4+T细胞由肾癌细胞、前列腺癌细胞刺激后IFN-γ分泌均没有明显变化；(3)冷冻消融术前、术后7天、术后14天、术后21天，肿瘤引流淋巴结CD8+CTL对前列腺癌细胞杀伤活性分别为(14．8±0．84)%、(62．6±2．30)%、(49．8±3．70)%、(15．6±1．14)%，对肾癌细胞杀伤活性无明显变化，而脾脏CD8+CTL对前列腺癌细胞、肾癌细胞杀伤活性均没有明显变化；(4)冷冻消融治疗术前、术后7天、术后14天、术后21天肿瘤局部DC数量分别为每高倍视野下(1．6±0．55)个、(8．6±1．14)个、(4．4±1．14)个、(1．8±0．84)个(P＜0．05)，引流淋巴结DC比例分别为(3．84±0．50)%、(8．56±0．50)%、(5．32±0．39)%、(3．66±0．51)%(P＜0．05)，DC活化比例分别为(11．2±0．84)%、(25．8±0．84)%、(18．6±1．52)%、(11．6±1．14)% (P＜0．05)，而脾脏DC数量及活化比例无明显变化；(5)相关性分析表明引流淋巴结CD4+T细胞、CD8+CTL细胞的肿瘤特异性免疫反应与DC比例及活化直接相关(P＜0．05)；(6)冷冻+GM-CSF治疗术前、术后7天、术后14天、术后21天肿瘤局部DC数量分别为每高倍视野下(1．6±0．55)个、(18．4±1．14)、(15．8±0．84)、(8．2±1．30)个(P＜0．05)，引流淋巴结DC数量比例分别为(3．88±0．31)%、(13．38±1．18)%、(11．08±0．84)%、(9．14±0．34)%(P＜0．05)，DC活化比例分别为(11．2±0．84)%、(31．4±1．82)%、(24．8±0．84)%、(19．0±1．58)%(P＜0．05)；而脾脏DC数量比例分别为(4．80±0．20)%、(13．2±1．30)%、(9．16±0．47)%、(6．94±0．32)%(P＜0．05)，DC活化比例分别为(12．8±1．3)%、(32．8±2．39)%、(26．4±1．14)%、(21．0±1．58)%(P＜0．05)；(7)冷冻+GM-CSF治疗术前、术后7天、术后14天、术后21天，肿瘤引流淋巴结CD4+T细胞由前列腺癌细胞刺激后IFN-γ分泌阳性细胞数每10~6T细胞分别为23．2±1．48、360．4±4．28、239．8±4．66、109．8±6．94(P＜0．05)，而肾癌细胞刺激后IFN-γ分泌无变化。脾脏CD4+T细胞由前列腺癌细胞刺激后IFN-γ分泌阳性细胞数每10~6T细胞分别为23．6±1．14、129．8±3．49、91．0±2．92、46．6±3．29(P＜0．05)，而肾癌细胞刺激后IFN-γ分泌无变化；(8)冷冻+GM-CSF治疗术前、术后7天、术后14天、术后21天，肿瘤引流淋巴结CTL对前列腺癌细胞杀伤活性分别为(14．8±0．84)%、(75．6±1．14)%、(64．6±1．52)%、(37．6±2．07)%(P＜0．05)，对肾癌细胞杀伤活性治疗前后无明显变化。脾脏CTL对前列腺癌细胞杀伤活性分别为(12．8±0．84)%、(47．4±1．14)%、(40．4±1．82)%、(32．2±1．48)%(P＜0．05)，对肾癌细胞杀伤活性治疗前后无明显变化；(9)冷冻+GM-CSF治疗术前、术后7天、术后14天、术后21天外周血Th1/Th2比值分别为6．24±0．58、13．16±0．38、14．91±0．63、15．13±0．50(P＜0．05)；(10)冷冻消融组、冷冻+GM-CSF治疗组术后21天淋巴结转移率分别为80%、40%，肺转移率分别为80%、20%，中位生存期分别为(55．0±1．38)天、(72．4±1．84)天。结论：冷冻消融治疗可升高Th1/Th2比值，诱导机体抗肿瘤免疫向Th1优势转化，但随时间延长有逐渐降低趋势。冷冻消融可诱导局部引流淋巴结T细胞的特异性抗肿瘤免疫反应，但不能诱导脾脏T细胞的特异性抗肿瘤免疫反应。冷冻消融诱导的肿瘤特异性免疫反应与DC数量及活化比例有关。冷冻联合GM-CSF治疗可增加肿瘤组织局部DC浸润、增加局部淋巴结、脾脏DC数量及活化比例，明显增强局部引流淋巴结以及脾脏T细胞的特异性抗肿瘤免疫反应，提高Th1/Th2比值，有效降低肺转移率，延长生存期，达到原位DC肿瘤疫苗的疗效。