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目的研究雷公藤甲素(Triptolid, TPL)诱导人胰腺癌细胞凋亡的作用与14-3-3γ蛋白的相关性,探讨14-3-3γ在雷公藤甲素诱导胰腺癌细胞凋亡中的作用机制。方法胰腺癌AsPC-1细胞常规培养于含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液中,取对数生长期的细胞用于实验。1.分别应用MTT法与流式细胞术(FCM)检测TPL对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响作用;2. Western blotting检测TPL诱导人胰腺癌AsPC-1细胞凋亡后,细胞内14-3-3γ蛋白表达,并应用相对定量法分析比较不同实验组细胞内14-3-3γ蛋白表达的差异。结果1.从细胞形态学改变来看,对比同期培养的正常对照组细胞,分别给予12.5ng/ml、25ng/ml、50ng/ml TPL作用48小时的各实验组胰腺癌细胞逐渐变得稀少,大多数细胞因发生不同程度的凋亡而固缩。2. MTT检测细胞生长状况结果显示:分别给予终浓度为6.25ng/ml~200ng/ml雷公藤甲素诱导24h、48h、72h后,各实验组细胞的生长均可不同程度受到抑制(分别F=28.21,p=0.00<0.01;F=136.00,p=0.00<0.01;F=282.28,p=0.00<0.01);予12.5ng/ml雷公藤甲素诱导24h、48h、72h后测得细胞生长率分别为88.22±4.73%、43.94±2.58%、20.84±2.63%,各组间差异具有统计学意义(F=293.54,p=0.00<0.01)。雷公藤甲素可显著抑制胰腺癌AsPC-1细胞的增殖,并表现为一定剂量——效应和时间——效应依赖关系。3. FCM检测细胞细胞凋亡比例的结果显示:分别予0ng/ml、6.25ng/ml、12.5ng/ml、25ng/ml雷公藤甲素诱导人胰腺癌AsPC-1细胞发生凋亡,给药48小时后收集细胞样本,应用流式细胞术检测的各个实验组细胞凋亡比例分别为2.40±0.48%、15.14±2.56%、29.56±2.73%、58.27±2.84%,各组间细胞凋亡比例差异有统计学意义(F=309.657,P=0.00<0.01)。4.Western Blotting结果显示:(1)相对于无处理对照组,给予12.5ng/ml、25ng/ml、50ng/ml雷公藤甲素诱导人胰腺癌AsPC-1细胞48h后,各实验组细胞14-3-3γ蛋白的相对表达均下调(χ2=10.769, p=0.013<0.05)。(2)相对于给药12h实验组,以25ng/ml雷公藤甲素24h、48h、72h后AsPC-1细胞14-3-3γ蛋白的相对表达均下调(χ2=11.205, p=0.011<0.05)。结论:1.从细胞水平进一步证实,雷公藤甲素对胰腺癌细胞具有显著的增殖抑制和凋亡诱导作用;2.本研究首次发现并验证了雷公藤甲素可下调胰腺癌细胞14-3-3γ蛋白表达;3.14-3-3γ可能作为雷公藤甲素诱导人胰腺癌细胞发生凋亡的一个重要靶分子,在雷公藤甲素抑制胰腺癌细胞生长、诱导胰腺癌细胞凋亡的作用中具有重要的作用,其具体的机制有待于进一步的实验研究来阐明。