论文部分内容阅读
结肠癌是目前最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率呈逐年上升趋势,严重影响人类生命健康。结肠癌一般起病隐匿,早期症状不明显,多数患者首次就诊时已发生癌细胞的侵袭和转移,术后生存率低,因此早期发现和诊断对提高结肠癌治疗效率和改善预后至关重要。结肠癌起源于正常结肠粘膜,后发展为腺瘤性息肉,再发展为原位癌、浸润癌,其癌变是一个循序渐进的多阶段过程,其中涉及多基因多因素和表观遗传学变化。因此研究结肠粘膜癌变多阶段过程中的蛋白质变化,对阐述结肠癌癌变机制和寻找早期诊断标志物有十分重要的科学价值和指导意义。本研究采用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术纯化结肠癌不同癌变阶段的上皮细胞,然后采用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification, iTRAQ)技术联合纳升液相色谱和串联质谱(nano liquid chromatography-tandem mass spectrometry, NanoLC-MS/MS)技术鉴定结肠癌癌变过程中的差异表达蛋白质。此次研究共鉴定了433个差异表达蛋白质,K-means聚类分析将这些蛋白质分为25簇,三大群。GO分析结果显示,差异表达蛋白质主要参与细胞通讯、发育、免疫、运输、应激反应、细胞粘附、细胞周期、凋亡、结合等生物学过程。信号通路分析显示这些蛋白质主要涉及整合素信号通路、炎症趋化因子和细胞因子信号转导通路、FAS信号通路、细胞凋亡信号通路、p53通路、血管生成、Wnt信号通路、钙粘蛋白信号通路、P38MAPK等癌症相关信号通路。同时采用Western Blot和免疫组化对其中的MYH9和PDCD4蛋白质在结肠癌癌变各阶段组织中的表达情况进行验证,结果与质谱定量分析的结果一致,统计学分析表明MYH9表达水平与结肠癌患者淋巴结转移和临床分期相关。本研究采用LCM综合运用iTRAQ和NanoLC MS/MS技术成功鉴定了结肠癌癌变相关的差异表达蛋白质,首次报道了MYH9表达水平在结肠癌癌变过程中的逐渐上升趋势,并与结肠癌的淋巴结转移和临床分期相关,为结肠癌早期诊断标志物的筛选和癌变机制分子机理研究奠定了基础。