不同蜂蜜中蛋白的差异研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 11次 | 上传用户:danNyZ
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本实验对荔枝、龙眼、洋槐、枇杷、椴树、油菜六种蜂蜜分别进行取样,然后对六种蜂蜜的蛋白进行提取、分离和纯化;用SDS-PAGE凝胶电泳技术和双向电泳技术对六种蜂蜜的蛋白质进行对比和分析,从中找出他们的共同蛋白和差异蛋白,通过对蜂蜜蛋白的检测和分析,从中找出蜂蜜蛋白质图谱,进而对蜂蜜真假的检测提供有力的证据。通过对六种蜂蜜蛋白的研究和分析,得出如下结论:(1)六种蜂蜜中的蛋白含量极低,而且蛋白含量各不相同,荔枝、龙眼、洋槐、枇杷、椴树、油菜六种蜂蜜的蛋白质含量依次为:0.280mg/ml、0.208mg/ml、0.272mg/ml、0.176mg/ml、0.224mg/ml、0.192mg/ml。(2)六种蜂蜜的原蜜和成品蜜的蛋白质百分含量基本一致,说明蜂蜜加工过程对蛋白质的影响不大。(3)对六种蜂蜜蛋白定量后,按相同蛋白量上样进行电泳,图谱结果显示他们的蛋白在55kD附近含量都很大,但相互之间存在蛋白量的差异。大部分蛋白条带分布在20kD-110kD之间,六种蜂蜜蛋白种类虽然有很大的相似性,但六种蜂蜜也有各自的特异蛋白。(4)取等体积的六种蜂蜜,提取蛋白后将其定容到相同体积,各取10μL进行SDS-PAGE凝胶电泳,得出六种蜂蜜的蛋白图谱在55kD、35kD、30kD和25kD处都有蛋白条带,但是六组样品中的蛋白条带分布和颜色深浅却不相同;从六种蜂蜜蛋白图谱中可以得出枇杷蜂蜜蛋白含量最低;荔枝和龙眼蜂蜜的蛋白含量较高;椴树蜂蜜在116kD处的蛋白条带比其他样品要深的多,说明这些蛋白质种类虽然相同但含量不同。荔枝蜂蜜在65kD处有明显的区别于其他样品的条带出现,龙眼蜂蜜在120kD处有特异性蛋白条带,洋槐蜂蜜在85kD、50kD和22kD处有特异性条带出现,油菜蜂蜜的特异蛋白在23.5kD处,通过对蛋白含量和特异性蛋白的检测可以得出六种蜂蜜蛋白之间存在明显的差异。(5)分离出六种蜂蜜蛋白并定量,按相同蛋白量进行双向电泳,发现六种蜂蜜蛋白的等电点基本都集中在pH4-7之间。六种图谱的分布区域基本一致,每种蜂蜜的图谱中对应区域都存在其特有的蛋白分布点,分布最丰富的蛋白点集中在pH6-9且分子量在25kD-100kD之间。选取四个主要的区域进行分析,在分子量为26kD且pH在5-7之间,六种蜂蜜蛋白点表达量各不相同;分子量为85kD且pH从6.5-7.5之间六种蜂蜜的蛋白点表达量不同;分子量在55kD且pH值从6-8.5处六种蜂蜜蛋白的表达量差异十分显著;分子量在41kD且pH值从6-7.3处六种蜂蜜蛋白表达量各不相同,因此六种蜂蜜的蛋白点具有明显的差异性。(6)六种不同蜂蜜蛋白之间存在着差异,这对鉴别多种蜂蜜相互掺假有一定的参考价值。用相同的蛋白提取方法,在果葡糖浆中并没有蛋白被提取出来,这将对果葡糖浆这种假蜜的检测提供有利证据。
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