论文部分内容阅读
该文纯化了酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和大肠杆菌(Escherichia coli)的精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS),以酵母tRNA<,3Arg>,和大肠杆菌tRNA<,2Arg>为对象研究它们之间的交叉识别.氨酰反应的动力学常数表明酵母ArgRS能够氨酰化大肠杆菌的tRNA<,2Arg>,但催化效率较其氨酰化天然或转录的酵母tRNA<,3Arg>为低.而大肠杆菌ArgRS只能识 别大肠杆菌的tRNA<,3Arg>,不能催化酵母tRNA的氨酰化反应.编码大肠杆菌精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS)的基因argS被克隆到pMFT7-5载体上.研究结果表明,该新系统能够很 方便地提供大量的更高比活的大肠杆菌精氨酰-tRNA合成酶以进行该酶的NMR和结晶学研究 .大肠杆菌精氨酰-tRNA合成酶和谷氨酰-tRNA合成酶一样需要tRNA的参与才能进行氨基酸的活化反应.缺失突变研究表明,它的N一端结构域是酶分子必不可少的一部分.大部分缺失 突变酶不稳定,易降解.ERRS△1,缺失酶分子上第二个氨基酸的变种酶,具有与野生型酶 相同的ATP-PPi交换反应的活力,但是丧失了70%的氨酰化反应活力.