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人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus,RSV)广泛分布于世界各地,是导致婴幼儿严重下呼吸道感染的最重要的病毒病原之一,老年人和免疫缺陷病人也易遭受RSV引起的严重感染。RSV属于副粘病毒科肺病毒属,基因组为15.2 Kb的单股负链RNA,编码11种蛋白,其中G、F系包膜糖蛋白,为RSV中和抗原。与G蛋白相比,F蛋白不但具有B细胞抗原表位也有CD8+细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)抗原表位,且其抗原性极为保守,可产生交叉保护性免疫。从福尔马林灭活疫苗开始,人们已经研制了多种形式的RSV疫苗,但由于安全性和免疫原性等问题,至今尚未有能够用于预防人RSV感染的疫苗问世,因此世界卫生组织将发展RSV疫苗列为二十一世纪最优先发展的疫苗项目之一。非复制型第一代腺病毒载体(first generation replication deficient recombinantadenoviral vector,FGAd)具有繁殖滴度高、易纯化、能够感染分裂和非分裂细胞等优点而被广泛用于疫苗研究。FGAd曾被用于表达经基因工程改造的RSV G蛋白,在动物实验中获得了较好的免疫保护作用,然而以FGAd为基础开展RSVF蛋白疫苗研究尚未见报道。与FGAd相比,辅助病毒依赖型腺病毒载体(helper-dependent adenoviral vector,HDAd)可大大降低腺病毒(Adenovirus,Ad)特异性的细胞免疫反应,增强转染DC细胞能力,且转基因表达时间更加持久。以HDAd作为黏膜疫苗载体,开展RSV F蛋白疫苗研究有待深入研究。本课题首先用表达RSV F蛋白的FGAd重组腺病毒(FGAd-F)滴鼻免疫BALB/c小鼠,观察免疫保护效果和保护作用特点。结果表明:FGAd-F滴鼻免疫BALB/c小鼠能够诱导产生RSV特异性的血清IgG、黏膜IgA和CD8+CTL,抗体亚类分析显示诱导产生了Th1和Th2平衡的CD4+T细胞免疫应答,没有产生疾病增强,对RSV攻击具有一定的免疫保护作用。随后,我们用表达EGFP蛋白的HDAd重组腺病毒(HDAd-EGFP)滴鼻免疫BALB/c小鼠,探讨HDAd作为黏膜疫苗载体的可行性和合理性。结果表明:尽管与等量的FGAd-EGFP诱导产生相似的anti-Ad抗体,但HDAd-EGFP经鼻免疫小鼠可诱导产生更高的EGFP特异性的血清IgG、黏膜IgA和细胞免疫,且抗体亚类分析显示诱导产生了Th1和Th2平衡的CD4+T细胞免疫应答。另外HDAd-EGFP同源加强免疫也能提高EGFP特异性的体液免疫和细胞免疫。在上述研究的基础上,我们用表达RSV F蛋白的HDAd重组腺病毒(HDAd-F)经滴鼻途径免疫BALB/c小鼠,初步探讨了HDAd-F的免疫效果。结果表明:与等量的FGAd-F相比,HDAd-F经鼻两次免疫小鼠可诱导更好的RSV F特异性的黏膜免疫,HDAd-F经鼻一次免疫小鼠可诱导更高的RSV F特异性的血清抗体。综上所述,FGAd-F能够诱导有效的免疫保护作用,以FGAd为载体的疫苗是预防RSV等通过黏膜途径感染的病毒疫苗的一个重要方法。HDAd是一种理想的黏膜疫苗载体,适于经呼吸道黏膜感染的RSV疫苗的研制,通过提高转基因表达量、降低载体用量等措施,有望获得较好的免疫效果和免疫保护作用。