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研究目的: 分析mir-675-5p在不同人胰腺癌细胞中的表达,及其在癌组织中的表达量与患者生存预后的关系,并探究mir-675-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等方面的影响和可能的作用机制。 研究方法: 1.运用SPSS Statistics20软件及Graphpad Prism5软件对从TCGA数据库中获得的mir-675相关胰腺癌临床样本数据进行统计学分析,获得mir-675与胰腺癌患者生存时间、最大肿瘤直径及肿瘤TNM分期的关系。 2.运用qRT-PCR检测不同胰腺癌细胞中mir-675-5p的表达水平。利用RNA干扰技术将mir-675-5p mimics转入相对低表达mir-675-5p的胰腺癌细胞株,将mir-675-5p Inhibitor转入相对高表达mir-675-5p的胰腺癌细胞株。 3.分别运用CCK-8法、平板克隆形成试验、流式细胞术、Transwell迁移和侵袭实验检测mir-675-5p对胰腺癌细胞增殖、细胞克隆形成能力、细胞凋亡能力及细胞周期、细胞迁移和侵袭能力的影响,以探讨mir-675-5p对胰腺癌细胞功能学方面的影响。 4.运用qRT-PCR检测细胞周期相关基因RB1及细胞侵袭相关基因ZEB1、mir-200家族的表达量变化,Western blotting检测细胞增殖凋亡及侵袭相关指标PCNA、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3、MMP2、MMP9和上皮间质转化相关指标E-cadherin、N-cadherin、ZEB1、Snail、Slug、Vimentin的变化。 5.运用RNA干扰技术将UBQLN1 siRNAs转染入胰腺癌细胞使其低表达UBQLN1,并运用qRT-PCR法和Western Blotting法检测UBQLN1 siRNAs的干扰效率;将UBQLN1 siRNAs和mir-675-5p mimics共转染入Patu8988细胞,将UBQLN1 siRNAs和mir-675-5p Inhibitor共转染入SW1990细胞,检测共转染后ZEB1的mRNA和蛋白水平的变化。 研究结果: 1. Mir-675的高表达可使胰腺癌患者获得相对长的生存时间及相对小的最大肿瘤直径,而Mir-675的表达与胰腺癌患者肿瘤TNM分期无相关关系。 2. Mir-675-5p差异性表达于4种胰腺癌细胞株(Patu8988
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