【研究背景与目的】胃癌在世界范围内属于常见的恶性肿瘤,其发病率位列恶性肿瘤的第二位,我国胃癌患者中主要以进展期胃癌患者为主。虽然目前治疗胃癌的策略方案逐渐提升,然而进展期胃癌患者接受相关胃癌标准根治术后的五年生存率仍无较大改观,究其原因可能在于胃癌发生的具体病因及发病机制尚未阐明。因而,进一步研究胃癌发生发展的相关分子生物学基础,阐明胃癌发生发展的发病机理将有助于提高胃癌的诊断准确性、提供新颖有效的治疗手段和改善胃癌患者的预后等。micro RNA(mi RNA)是一类长度为20~24nt的内源性非编码单链RNA,通过与靶基因m RNA 3’端非翻译区(3’UTR)以完全或不完全方式结合从而导致靶基因m RNA发生降解和/或抑制靶基因m RNA翻译,进而对靶基因编码的蛋白进行调控。近年研究表明,mi RNA可以参与调控包括细胞的增殖、凋亡和转移等肿瘤细胞生物学行为。Micro RNA在胃癌中的表达情况及其在胃癌发生发展中的作用机制目前尚未完全阐明。前期研究中,采用mi RNA芯片和定量RT-PCR的方法,分析了180例胃癌病人和80例健康对照的血浆标本,发现胃癌病人血浆中mi R-199a-3p的含量显著高于健康对照。同时我们检测分析了9株胃癌细胞株与6例正常胃黏膜上皮mi RNA表达谱的差异,结果发现:mi R-199a-3p在胃癌细胞株中的表达均显著高于其在正常胃黏膜上皮中的表达。mi R-199a-3p在胃癌细胞株中的表达明显上调,提示其可能作为促癌性mi RNA参与促进胃癌的发展过程。然而,其在胃癌中的表达及其具体生物学功能和机制尚不明确。因此,本研究旨在进一步研究mi R-199a-3p与胃癌生物学特性之间的关系,阐明其在胃癌发病中的作用机制。【材料与方法】(1)应用q RT-PCR方法对mi R-199a-3p在6株胃癌细胞株与永生化胃黏膜细胞GES-1中的表达水平进行验证后,进一步采用q RT-PCR检测其在52例胃癌及其相对应癌旁组织中的表达水平,分析其与胃癌临床病理特点之间的关系。(2)采用mi R-199a-3p mimics与mi R-199a-3p逆转录病毒表达载体上调胃癌细胞株SGC-7901中mi R-199a-3p的表达水平,以及mi R-199a-3p inhibitors下调NCI-N87细胞株mi R-199a-3p的表达水平,观察其对胃癌细胞生物学行为的影响;(3)应用生物信息学预测mi R-199a-3p靶基因,进而结合双荧光素酶报告系统检测,q RT-PCR和免疫印迹的方法,筛选并验证mi R-199a-3p作用的靶基因,初步阐明mi R-199a-3p的参与胃癌发展的相关生物学分子机制。【结果】q RT-PCR检测结果显示,mi R-199a-3p在胃癌细胞株中的表达明显高于其在GES-1中的表达水平。mi R-199a-3p在52例胃癌组织中的平均表达水平显著高于其配对癌旁组织,且胃癌组织mi R-199a-3p表达水平与肿瘤组织侵袭程度及TNM分期存在显著相关性。上调mi R-199a-3p表达水平可显著提高胃癌细胞株SGC-7901、NCI-N87体外增殖、克隆形成及体内成瘤能力,同时抑制细胞凋亡发生;下调mi R-199a-3p可以逆转上述生物学行为。生物信息学预测分析提示转录抑制因子ZHX1的m RNA的3’UTR含有mi R-199a-3p直接作用靶基因序列,双荧光素酶报告系统检测进一步证实了ZHX1为mi R-199a-3p直接靶基因,q RT-PCR及免疫组化证实mi R-199a-3p对ZHX1蛋白表达的调控发生在转录后水平。【结论】mi R-199a-3p在胃癌细胞和组织中表现为高表达状态,其表达水平与肿瘤组织侵袭范围及TNM分期成正相关;上调mi R-199a-3p表达水平能促进胃癌细胞的恶性表型表达,反之亦然;mi R-199a-3p通过对其靶基因ZHX1的调控参与了胃癌增殖发展过程。