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白藜芦醇(Resveratrol,RES)是一种多酚类的天然活性物质,国内外研究表明其有多种药理活性,如抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗心脑血管疾病、抗病毒、肝脏保护及神经保护等作用。然而白藜芦醇水中溶解性较差、体内代谢快、口服生物利用度低等因素限制了临床应用与开发。纳米混悬剂(Nanosuspensions,Nps)是一种利用少量表面活性剂稳定药物粒子,均匀分散在水中而形成的一种胶体分散体系,具有较大的表面积,很大程度上可提高难溶性药物的溶出速率及程度,并有助于提高生物利用度。本实验研究采用纳米沉淀与高压均质结合的方法制备得到了白藜芦醇纳米混悬剂,主要研究内容包括白藜芦醇纳米混悬剂的处方筛选、新型稳定剂白藜芦醇-mPEG1000的合成与表征,以及白藜芦醇纳米混悬剂的制备、表征、体外释放、体内药代动力学、体内组织分布研究等。1.采用纳米沉淀结合高压均质的方法,以两亲性聚合物如PEG2000-PCL2000、PEG2000-PLA2000、PEG2000-PLGA2000、cholesterol-PEG1000(chol-PEG1000)、TPGS 以及静电稳定剂SDS、立体稳定剂SPC等制备RES-Nps,以粒径、PDI及表面电位为评价指标,筛选最佳处方。结果显示以PEG2000-PCL2000为稳定剂制备的RES纳米混悬剂最符合要求,粒径为(235.5±4.13)nm,PDI 为(0.14±0.02),电位为(-15.7± 1.03)mV。2.为了得到粒径更小(<200 nm)且更稳定的RES-Nps,设计以药物RES本身为疏水部分,接枝mPEG1000,合成新型稳定剂RES-mPEG1000,对其进行分离纯化和相关表征。1HMR分析图谱中同时出现RES和mPEG1000质子特征峰;MALDI-TOF质谱分析表明产物与目标产物的分子量基本吻合;HPLC显示产物酸水解后可得到RES,证明目标产物已合成,且纯度较高。3.以mPEG1000-RES为稳定剂制备药载比为10:1的RES-Nps,得到粒径为(187.7±4.87)nm、PDI 为(0.13±0.04)、zeta 电位为(-15.94±2.37)mV 的纳米粒。实测载药量为(86.10±1.74)%,包封率为(95.68±0.81)%,4 ℃下放置稳定性好,不溶血,适合静脉注射给药。透射电镜(TEM)显示RES-Nps为近乎球形结构,差示扫描量热法(DSC)及X-射线粉末衍射(XRD)测得RES在纳米粒中仍以晶型形式存在,体外释放表明,与RES药物溶液相比具有缓释效果,与RES原药粉混悬液相比,则增加了药物的溶出速率。4.以大鼠尾静脉注射考察RES-Nps的体内药代动力学行为。结果显示与RES溶液组相比,体内缓释效果显著,Cmax与AUC分别为溶液组的8.5倍和15.6倍,且半衰期明显延长(20.13 h vs 0.95 h),清除速率显著降低(1278.43 mL/h/kg vs 25674.00 mL/h/kg)。原因一方面可能是由于混悬剂中稳定剂表面长链PEG可阻止药物与血浆蛋白的结合,延长药物在血中的循环时间;另一方面,稳定剂中的疏水单元即为药物本身,使得制备的混悬剂相当稳定,体内不易解体,因此体内保留时间延长。5.小鼠体内组织分布研究表明,RES在小鼠体内分布广泛,在血流丰富的组织如肝脏、心脏和脾脏分布较多;和RES溶液相比,纳米混悬剂在各组织中分布的均较溶液组多,且心脏的AUC仅次于肝脏,提示白藜芦醇纳米混悬剂可能对治疗心脑血管方面疾病会有较好效果。和厚朴酚(Honokiol,HK)是从中药厚朴中提取的一种含有酚羟基的小分子生物活性物质,具有多种药理活性。近年来国内外研究报道其具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗心脑血管疾病、神经保护以及肝保护等作用。但由于和厚朴酚结构中存在酚羟基,稳定性不佳,且水中溶解性差使得应用受到限制。因此改善溶解性、提高稳定性是解决这一问题的关键。本实验研究中首先将和厚朴酚修饰为酯类前药,并借助表面活性剂将前药制备成纳米粒,希望通过纳米粒增溶及前药水解双重作用提高药物在血浆中的稳定性,延长静脉注射给药的半衰期。1.合成了 HK-己酸酯与HK-癸酸酯,并进行分离纯化。1HMR显示,两产物特征峰中HK原有的酚羟基的质子峰全部消失,并分别出现了己酰基与癸酰基的特征峰,表明目标产物成功合成。HPLC分析显示两种前药的纯度分别为98.13%与98.05%。两者在pH 2.0与pH 7.4溶液中水解释放出HK的速度均较慢,且脂肪链更长的癸酸酯水解稳定性更好。2.以不同稳定剂如 PEG2000-PCL2000、TPGS、SPC、chol-PEG1000、α-CD、HP-β-CD等制备HK前药不同药载比的纳米粒,考察将HK修饰为前药后是否具有制备纳米粒的可行性。结果显示均可制备得到纳米粒,其中以PEG2000-PCL2000为稳定剂制备的样品粒径最小最稳定。制备的药载比5:1的HK-己酸酯纳米粒粒径为(164.2±3.15)nm,PDI为(0.17±0.03),电位为(-27.2±2.14)mV;相同药载比的HK-癸酸酯纳米粒粒径为(131.9±1.26)nm,PDI 为(0.17±0.06),电位为(-27.4±2.45)mV,且随着药载比的降低粒径越小。通过考察溶血性等,最终选择药载比为1:10的HK-癸酸酯纳米粒进行后续研究。3.制备获得药载比为1:10的HK-癸酸酯纳米粒,粒径为(23.6±2.24)nm,PDI为(0.23±0.02),电位为(-15.3±0.82)mV,透射电镜(TEM)形态分析表明HK-癸酸酯纳米粒为圆整的球形结构;差示扫描量热法(DSC)分析得出HK-癸酸酯在纳米粒中以晶型结构存在;当浓度为4mg/mL时溶血百分比仅为2.1%,提示不溶血;体外释放缓慢,192 h累积释放达到80%。4.以HK纳米粒为对照进行HK-癸酸酯纳米粒大鼠体内药代动力学考察,结果显示,HK-癸酸酯纳米粒组给药后血浆中HK的Cmax、AUC以及半衰期分别为HK纳米粒组的2.97倍、2.05倍以及1.36倍,且清除率也显著减小,缓释效果显著,也表明HK-癸酸酯对HK起到药物储库的作用,入血后逐渐转化为HK,起到长效作用。5.以HK纳米粒为对照,考察HK-癸酸酯是否对HK体内组织分布产生影响,结果显示HK-癸酸酯纳米粒组各组织中HK的滞留时间均在不同程度上延长,且在心脏与肝脏中HK的分布明显高于HK纳米粒组,表明将HK修饰为HK-癸酸酯后,不但延长了 HK各组织内滞留时间,且改变了 HK体内分布情况。