胰腺癌Kras基因突变与Glut-1表达相关性的研究

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目的:1.研究胰腺癌组织中Kras基因点突变状态;2.研究胰腺癌中葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter isoform1,Glut-1)的表达;3.研究胰腺癌中Kras基因点突变与Glut-1表达相关性以及与患者临床病理特征的相关性。  方法:1.收集46例胰腺癌患者组织蜡块,将石蜡组织DNA提取和纯化,运用荧光定量PCR测序法检测Kras基因2号外显子的12、13密码子的突变,对PCR产物测序,采用Sequence Analysis软件进行序列分析;2.对以上46例胰腺癌患者组织蜡块,采用免疫组织化学染色链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接(SP)法,参照EliVision plus试剂盒说明书进行操作,检测Glut-1在胰腺癌组织及癌旁正常组织中的表达。所有染色切片均在光学显微镜下观察,肿瘤细胞阳性率评分+肿瘤细胞着色强弱评分作为最终评分。根据最终评分,将Glut-1染色分为4个等级;3.采用SPSS19.0统计软件进行数据处理,Glut-1表达,Kras突变与各临床指标的关系之间比较采用卡方检验,Glut-1表达与Kras突变的相关性用Spearman法,p<0.05为差异有统计学意义。  结果:1.46例胰腺癌患者中有26例存在Kras基因突变(56.5%),包括24例12密码子突变,其中3例为GGT突变为CGT(G-C),13例为GGT突变为GAT(G-A),8例为GGT突变为GTT(G-T);2例13密码子突变,其中1例GGC突变为GAC(G-A);1例GGC突变为GGT(C-T)。2.46例胰腺癌组织中Glut-1的阳性表达率为86.9%(40/46),棕黄色或棕褐色阳性染色颗粒位于胞浆和/或胞膜,主要定位于细胞膜。而在正常癌旁组织中Glut-1均为阴性表达,两者之间存在显著差异(P<0.01)。3.Kras的突变和肿瘤大小、神经侵犯相关(P<0.05),与年龄、性别、淋巴结转移、肿瘤部位、临床分期、病理类型、病理分级无关。4.Glut-1的表达和年龄、肿瘤大小、肿瘤部位相关(P<0.05),与性别、淋巴结转移、神经侵犯、病理分级、临床分期、病理类型无关。5.Glut-1表达与Kras突变在胰腺癌组织中呈正相关。在Glut-1阳性表达的标本中,随着Glut-1染色评分的递增,Kras基因的突变率明显增加,有明显相关性(r相关系数=0.99,P<0.05)。  结论:1.胰腺癌组织中存在较高的Kras基因突变。2.胰腺癌组织中存在较高的Glut-1阳性表达。3.在胰腺癌组织中,Glut-1阳性表达强弱与Kras突变之间呈正相关,Glut-1高表达与Kras基因突变可能协同促进了胰腺癌的恶性病变。
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