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老年痴呆症是常见的神经退行性疾病,患者具有大脑萎缩、细胞外出现淀粉样斑块、细胞内神经纤维缠结、神经元大量丧失,以及金属离子的过量堆积等临床病理特征。近年来的研究表明:金属离子(如Cu2+)引起的氧化应激和异常聚集的Aβ可能是导致AD的主要原因。具有氧化还原活性的Cu2+能催化产生自由基,破坏线粒体的正常生理功能,诱导细胞膜、组织和酶氧化损伤,最终导致神经变性疾病;Aβ聚集形成的聚集物(寡聚体、纤维等)可以破坏细胞膜,引起炎症反应,导致神经元凋亡。本文以米糠为原料,提取其中的粗黄酮,研究米糠粗黄酮对金属离子引起的氧化应激和异常聚集的Aβ导致的神经毒性的影响。利用CCA荧光法、原子力显微镜、噻哇蓝、MTT实验、Hoechst 33258染色实验、DCFH-DA测内源性RO实验、western blot实验探讨了米糠粗黄酮(Crude flavonoids from Rice bran,FRB)抑制羟基自由基和 Aβ诱导的 SH-SY5Y细胞凋亡的作用及机理的初步研究。通过本论文的研究发现:1.利用酶解辅助超声的方法提取米糠粗黄酮并对其提取工艺进行优化,米糠粗黄酮的提取率达到3.26%。HPLC初步检测米糠粗黄酮中含有柚皮素成分,含量占4.47%。2.米糠粗黄酮能减少Cu2+催化H2O2、Cu2+诱导抗坏血酸(AA)产生的羟基自由基。CCA荧光实验表明米糠粗黄酮能分别使Cu2+催化H202、Cu2+诱导AA产生的羟基自由基的量降低61.82%、57.46%。通过MTT实验发现60 μg/mL的米糠粗黄酮使羟基自由基损伤的SH-SY5Y细胞的存活率由(25.97±2.06)%增加至(76.96±4.39)%。因此,米糠粗黄酮可以通过抑制羟基自由基的生成,从而抑制SH-SY5Y细胞的凋亡。3.米糠粗黄酮能抑制Aβ(1-42)毒性聚集物的产生。利用AFM检测发现米糠粗黄酮能减少Aβ(1-42)毒性聚集物(寡聚体、纤维前体、纤维)的产生,改变Aβ(1-42)的聚集路径。在一定浓度范围内,米糠粗黄酮浓度越高,抑制Aβ(1-42)聚集物生成的效果更明显。4.米糠粗黄酮能抑制Aβ(1-42)毒性聚集物诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡。通过MTT和Hoechst 33258实验发现80μM Aβ(1-42)处理的细胞存活率为(52.25±1.34)%,且细胞呈极亮的蓝色。120μM米糠粗黄酮使SH-SY5Y细胞的存活率由(52.25±1.34)%增加至(91.47±1.45)%,细胞极亮的蓝光减少,细胞核形态呈均一饱满状。说明米糠粗黄酮能明显抑制Aβ(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡。5.米糠粗黄酮能减少细胞内源性ROS和下调caspase-3,从而抑制Aβ(l-42)诱导SH-SYSY细胞的凋亡。通过DCFH-DA测细胞内源性ROS发现,米糠粗黄酮使细胞内源性ROS由1.72±0.02降低到1.12±0.04,从而保护SH-SY5Y细胞免受Aβ(1-42)诱导的损伤。western blot实验结果表明Aβ(1-42)能极显著性(p<0.01)的上调细胞caspase-3的表达,而120 μM的米糠粗黄酮使caspase-3的蛋白表达相对量由1.73± 0.07降低到1.07±0.02。因此米糠粗黄酮可以通过下调caspase-3,从而抑制Aβ(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡。综上,本文对米糠粗黄酮的提取工艺进行优化,并利用HPLC初步测定其成分;研究了米糠粗黄酮对羟基自由基和Aβ诱导SH-SY5Y凋亡的抑制作用,并对其机理进行了初步探究;为米糠的综合利用提供了新的研究方向,为AD的治疗提供了新思路,为开发新的治疗药物提供了理论依据,具有重大的现实意义。