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研究背景和目的 肺癌是目前世界上最常见的男性恶性肿瘤，是严重威胁人们健康和生命的疾病。研究肺癌细胞生长的关键调节基因，并采用有效的方法“封闭”这些基因，无疑将是肺癌基因诊断治疗的关键途径，也是目前医学研究的热点。近年来，研究发现PLK1(polo-like kinase 1)基因在有丝分裂过程中起重要的调节功能，并且在多种的人类肿瘤包括肺癌中发现PLK1基因表达升高，提示PLK1的增长表达在细胞的增殖中起重要作用，预示PLK1可能是一个新的肿瘤标记物。目前国内未见有人报道在人类肺癌中PLK1的表达情况及与临床的相关性，为 浙江大学博士学位论文了评价PLKI表达与肺癌临床的相关性，准确定量地分析肺癌中PLKI的表达水平，我们采用荧光探针实时定量PCR(nuorescent real一timequantitative PCR，FQ一PCR)技术，探讨肺癌与肺良性疾病纤维支气管镜活检组织中PLK 1 mRNA表达水平，以及PLKllllRNA水平与肺癌临床病理分期分型之间的相关性。为进一步研究PLKI在肺癌基因诊断及治疗中的作用提供实验依据。方法 采用荧光探针实时定量pCR技术[fluoreseent real一timequantitative pCR(FQ一pCR)]检测69例原发性肺癌和25例肺部良性疾病的PLKllllRNA表达水平，分析其与临床特点的相关性。所有的病例均来自于浙江大学医学院附属邵逸夫医院门诊或住院的病人，经纤维支气管镜获取组织标本，经组织病理学诊断为原发性支气管肺癌或良性病变，所取标本与病理学诊断的标本取自同一部位。69例肺癌患者男性61例，女性8例，年龄40一80岁，平均年龄62岁;肺部良J胜疾病组28例，男性20例，女性8例，年龄21一79岁，平均年龄53岁。69例肺癌患者包括鳞癌34例，腺癌17例，小细胞肺癌18例。根据UICC 1997分期标准51例非小细胞肺癌包括原位癌1例，I期4例，11期12例，Illa期16例，Illb期一IV期15例，3例无法分期。小细胞肺癌包括局限期7例，广泛期n例。良胜病变组中肺结核12例，慢性炎症16例。所取的活检标本置于生理盐水的试管中，冻于一80℃保存;经RNA提取，cDNA合成，所得cDNA用于PCR扩增。荧光探针实时定量PCR检测，并计算出Ct值。相同组织中PLKI和 浙江大学博士学位论文G妙DH的初始模板量的比值为ZCtGAPDH一CtPLK‘，代表肺癌组织和良哇组织中PLKI mRNA的表达水平。2%琼脂糖电泳观察DNA条带。 统计学方法数据以均数士标准差(护s)表示，两组间的比较采用非参数Mann认电itneyU检验。所有数据统计在SPSS 12.0 for windows版软件包上完成。结果， 研究结果发现，在肺癌纤维支气管镜活检标本中PLK 1 mRNA表达为0.124士 0.194，明显高于肺部良性疾病组0.037士0.042，两者比较具有明显的统计学差异(P=o.03，Mann一Whltney Utest)，见表。良性组均小于0.15，肺癌组有23.1%(16/69)超过该值。 肺癌各病理类型PLKI均数分别为鳞癌0.098士0.146，腺癌0.107士0.170，小细胞肺癌o，191士0.275，统计分析虽无显著性差异(外0.05，M~一whltney U test)，但从分布趋势图来看，小细胞肺癌PLKImRNA表达水平高于非小细胞肺癌。 PLK 1 mRNA表达水平在肺癌不同TNM分期分别为I期一nla期PLKI为0.1367士0.2212，Illb期一IV期为0.107肚0.1534。经Mannwhi饥eyU检验，两组之间无统计学差异(u=0.484，P二0.555)。 肺癌患者中年龄、吸烟年支与PLK 1 mRNA表达水平的散点图分析表明无明显的相关性。结论 1.肺癌活检组织中PLK IlnRNA表达明显高于肺部良性疾病组，提示PLKI可能是一个潜在的肺癌标记物。浙江大学博士学位论文2.肺癌各病理分型之间的PLK 1 mRNA表达水平的均数在小细胞肺癌组高于非小细胞肺癌组，可能与细胞的增殖活性有关。3.肺癌不同的TNM分期，PLK 1 mRNA表达无明显的统计学意4.肺癌患者中年龄、抽烟与PLKI mRNA表达无明显的相关性。