目的:研究 survivin 反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响,并探讨反义寡核苷酸与传统化疗药物对白血病的联合治疗作用。 方法:1、转染 survivin 反义寡核苷酸对 K562 细胞 survivin 蛋白表达的影响。实验分四组:反义组、无义组、脂质体组、空白组。反义及无义寡核苷酸两端均有 5 个碱基硫代修饰,经阳离子脂质体介导的方式进行转染。转染 24 小时后用免疫组化的方法检测 survivin 蛋白表达。2、survivin 反义寡核苷酸对 K562 细胞凋亡影响。实验分四组:反义组、无义组、脂质体组、空白组。转染 24 小时后用免疫组化的方法检测 caspase-3 活性,并在转染后不同时段用 TUNEL 及 Annexin V-FITC 法测定各组细胞的凋亡率。3、足叶乙甙对 K562 细胞的抑制作用。用 MTT 法测定不同浓度的足叶乙甙对 K562 细胞的抑制率,结合形态学确定适用于联合 survivin 反义寡核苷酸的足叶乙甙的浓度。4、Survivin 反义寡核苷酸联合化疗药物足叶乙甙共同作用于 K562 细胞,实验分四组:联合组、反义组、足叶乙甙组、空白组。用 TUNEL 及Annexin V-FITC 法测定各组细胞的凋亡率。 结果:1、Survivin 蛋白在 K562 细胞中呈高表达,转染反义寡核苷酸后 survivin 蛋白表达下调,而无义组及脂质体组无明显变化。2、转染 survivin 反义寡核苷酸 24 及 48 小时,反义组 caspase-3 活性较无义组、脂质体组及空白对照组增高(p<0.05)。反义组 48 小时 caspase-3活性高于 24 小时(p<0.05),有统计学意义。TUNEL 法检测发现转染后 24 小时、48 小时,细胞阳性率分别为 22%、32%左右,均较其他