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背景和目的:原发性肝癌是当今世界最常见的恶性肿瘤之一,有很高的发病率和死亡率,预后较差。寻找能够用于原发性肝癌早期诊断、治疗的靶点是提高和改善原发性肝癌预后的重要方法。Tripartite motif containing 59(TRIM5 9)蛋白属于TRIM家族一员,具有一个 RING 结构域(RING finger domain)、一个 B-box 结构域(B-box domain)、两个卷曲螺旋和一个跨膜结构域。目前,有研究发现TRIM59在胃癌、肺癌、结肠癌等许多恶性肿瘤中表达上调,但TRIM59在肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况及具体作用仍不明确。因此,本课题通过体内、外实验,详细阐述TRIM59在肝细胞肝癌中的表达情况,并进一步探索该基因参与肝癌发生发展的生物学机制。实验方法:我们首先对Oncomine以及TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库进行检索,运用生物信息学方法分析TRIM59的mRNA在肝细胞肝癌中的表达情况以及与预后的相关性。然后运用实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCRDetecting System,qPCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)和免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)技术检测TRIM59在肝细胞肝癌组织和癌旁正常组织中的表达情况。构建TRIM59敲减以及过表达的肝癌细胞株,通过CCK-8(Cell counting kit-8)细胞增殖实验、克隆形成实验(Clone formation assay)、Transwell迁移实验以及裸鼠皮下成瘤实验等,观察TRIM59对肿瘤增殖、转移能力的影响。此外,通过免疫共沉淀、质谱分析、qPCR、WesternBlot、免疫荧光、蛋白质半衰期检测和蛋白泛素化检测等实验,分析TRIM59在促进肝癌发生发展中的潜在机制。实验结果:生物学分析发现,TRIM59的mRNA水平在肝细胞肝癌中显著升高,并且与患者预后有显著相关性。在103对肝细胞肝癌及对应的癌旁正常组织标本中,TRIM59蛋白在癌组织中表达升高的有65例(63.1%),表达不变或者降低的有38例(36.9%)。结合患者的随访数据,进行Kaplan-Meier生存分析,结果发现TRIM59表达升高的患者术后5年生存率显著低于表达降低的患者(p<0.001)。在Huh7细胞中过表达TRIM59蛋白,在HCCLM3细胞中敲减TRIM59蛋白,功能实验结果发现,过表达TRIM59可显著促进肝癌细胞增殖和转移,而在TRIM59敲减的细胞系中,肝癌细胞的增殖和迁移能力受到抑制。在裸鼠皮下成瘤实验中,TRIM59敲减组的裸鼠成瘤能力显著减弱。进一步,我们分析发现TRIM59和NF-κB磷酸化及下游靶基因的表达存在明显正相关性。因此,我们通过免疫共沉淀、质谱分析及免疫荧光等实验发现,TRIM59蛋白的RIING结构域能与NF-κB通路的抑制蛋白PPM1B相互结合,促进PPM1B的泛素化降解,通过PPM1B/IKKβ/NF-κB信号通路,影响下游靶基因的表达,最终促进肿瘤的发生发展。结论:TRIM59在肝细胞肝癌患者中表达升高,与’患者预后存在明显相关性。TRIM59可以作为肝细胞肝癌潜在的标志物,能为HCC的临床诊断及预后分析提供一定的参考。同时,我们发现TRIM59能明显促进肿瘤细胞的增殖、迁移和成瘤能力。此外,TRIM59能通过泛素化调节PPM1B蛋白的降解,促进IKKβ的磷酸化,激活NF-κB信号通路,促使肝癌的发生发展。