论文部分内容阅读
目的:川崎病(Kawasaki disease,KD)是一种急性、全身性血管炎症性疾病,冠状动脉损伤是其最严重并发症,炎症级联反应及氧化应激损伤致内皮功能障碍是其关键环节。褪黑素具有抗炎及抗氧化作用,在多种心血管疾病中具有保护作用。本研究探讨褪黑素是否在KD急性期通过改善内皮细胞功能保护冠状动脉损伤。方法:(1)收集KD急性期患儿、发热对照组和正常对照组血清,用ELISA法检测各组血清中多配体聚糖-1(syndecan-1,SDC-1)、IL-6、sICAM-1水平;(2)单次腹腔注射干酪乳杆菌细胞壁提取物(lactobacillus casei cell-wall extract,LCWE)诱导小鼠KD冠状动脉炎模型,并用褪黑素干预,行心脏病理学检查,利用ELISA检测血清SDC-1水平,RT-qPCR及WB检测IL-1β、TNF-α、ICAM-1、SOD-1、GPx、SOD-2等表达水平;(3)褪黑素预处理后,用TNF-α刺激人冠状动脉内皮细胞(Human coronary artery endothelial cells,HCAECs),检测总SOD活力,用RT-qPCR检测ET-1及IL-6、MMP-9、ICAM-1表达水平,ELISA检测细胞上清SDC-1水平。结果:(1)与健康对照组和发热对照组相比,KD患者的血清SDC-1水平显著增高、白蛋白和血红蛋白显著降低(p<0.05)。在KD急性期,冠状动脉损伤患儿SDC-1明显增高、白蛋白和血红蛋白明显降低(p<0.05)。IVIG治疗后,KD患儿IL-6、sICAM-1和抵抗素水平下降,SDC-1水平显著升高(p<0.05)。(2)褪黑素干预后冠状动脉炎小鼠心脏HE染色显示炎症浸润减轻,IL-1β、TNF-α、ICAM-1等mRNA表达下降,SOD-1、SOD-2、GPx、CAT等抗氧化因子mRNA表达水平增高,电镜可见血管内皮细胞损伤恢复,血清SDC-1水平显著降低。(3)不同浓度褪黑素预处理后,10 ng/ml TNF-α干预HCAECs 12小时,过度表达的ET-1及IL-6、MMP-9、ICAM-1等炎症因子mRNA水平下降,细胞培养上清SDC-1浓度降低,细胞总SOD活力恢复。结论:(1)血清SDC-1水平可能反映川崎病急性期血管炎症及内皮细胞损伤,与冠状动脉损伤有关;(2)褪黑素参与抑制冠状动脉炎内皮细胞SDC-1脱落;(3)褪黑素可通过抑制TNF-α诱导的SDC-1过度降解保护内皮功能。