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目的: 在前期的研究中,我们发现miR-4530在糖尿病伴视网膜病变的病人血清中上调,在线miRNA靶基因预测数据库显示miR-4530其中一个靶基因是VASH1,并且在人脐静脉内皮细胞中进行了初步的验证,确定了miR-4530具有促进内皮细胞形成血管结构的活性。在本研究中,我们的研究目的是探索是否miR-4530促进血管形成的能力能否用于调控肿瘤血管的形成,从而在抑制肿瘤血管形成的治疗方法上,提供一个新的靶点和思路。 方法: 1)我们通过给两种乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7转染miR-4530的干扰质粒,构建了稳定干扰miR-4530的细胞株,包括高表达株、低表达株和空载对照细胞株。 2)测定干扰后细胞的各项细胞功能及相关的mRNA和蛋白质的表达。包括血管形成实验、细胞增殖、细胞周期和凋亡、克隆形成实验和VASH1的mRNA和蛋白水平表达量。 3)将稳定转染的MDA-MB-231细胞株接种到2个月大的雌性裸小鼠的皮下,并监视成瘤情况及记录成瘤体积。 结果: 1)通过荧光定量检测转染后的单克隆细胞株miR-4530的表达量,筛选出来了稳定干扰的细胞株。 2)高表达miR-4530后,两种乳腺癌细胞株均表现为增殖能力降低,凋亡比率增加,VASH1的mRNA和蛋白表达水平都明显降低,但其成管能力明显增强;低表达miR-4530后,细胞增殖能力有所增强,凋亡减少,VASH1的mRNA与蛋白表达水平有一定的增加,但其成管能力明显被抑制。 3) MDA-MB-231细胞高表达miR-4530后,其生存能力降低,接种到雌性裸小鼠皮下后,成瘤率低,生长速度慢,瘤体小。低表达miR-4530后,早期生长速度与对照组并无差异,待瘤体积增大后,生长速度不及对照组,且不断变慢。 结论 1)高表达miR-4530通过降低VASH1的表达,增强乳腺癌细胞透导血管形成的能力,但同时会抑制乳腺癌细胞本身的生长能力。低表达miR-4530能增加VASH1的表达,从而抑制乳腺癌的血管形成,并增强乳腺癌细胞的克隆形成能力。 2)在肿瘤生长过程中,无论高表达或者低表达miR-4530,对肿瘤的生长都是不利的。早期高表达miR-4530对肿瘤细胞的生存是不利的,晚期低表达miR-4530对诱导血管生存是不利的。