目的:　　OxyR作为细菌中的重要调控子，在面对氧化应激时发挥重要作用，它可以帮助细菌抵御氧化损伤。OxyR在伤寒沙门菌中的调节机制还不是非常的全面，这次实验我们通过基因芯片的方法筛选受OxyR调节的基因，并对其中新发现的调控基因进行了进一步的研究。　　方法:　　1.伤寒沙门菌基因芯片分析oxyR对系统基因表达影响:　　将伤寒沙门菌野生株和oxyR基因缺陷变异株（ΔoxyR）培养至OD6000.4，给予氧应激(4 mmol/L H2O2)20 min后，提取细菌总RNA，进行逆转录并用荧光素Cy3-或Cy5-进行互标cDNA后，与S.Typhi基因组芯片杂交，扫描芯片并用软件分析结果。　　2.qRT-PCR检测伤寒沙门菌oxyR对Vi荚膜抗原相关基因表达影响:　　将伤寒沙门菌野生株、ΔoxyR、oxyR缺陷回补株(ΔoxyR+pBAD-oxyR)、oxR缺陷回补空质粒株（ΔoxyR+pBAD）培养至OD6000.4，给予氧应激(4mmol/LH2O2)20 min或不给予氧应激，提取细菌总RNA后，逆转录并进行qRT-PCR。分析伤寒沙门菌各菌株中tviA、tviE、vexE的表达量。　　3.酶免疫吸附法(ELISA)检测伤寒沙门菌Vi荚膜抗原:　　将伤寒沙门菌野生株、ΔoxyR、oxyR缺陷回补株（ΔoxyR+pBAD-oxyR）、oxyR缺陷回补空质粒株（ΔoxyR+pBAD）各菌株培养至OD6000.4后，分别加入兔源抗Vi抗血清和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗进行孵育，加入终止液终止反应后，通过酶标仪在450nm处检测荧光强度来检测菌株表面Vi抗原的表达量。　　4.流式细胞术检测伤寒沙门菌Vi荚膜抗原的表达:　　将伤寒沙门菌野生株、ΔoxyR、oxyR缺陷回补株(ΔoxyR+pBAD-oxyR)、oxyR缺陷回补空质粒株（ΔoxyR+pBAD）各菌株培养至OD6000.4后，分别加入兔源抗Vi抗血清和FITC标记的羊抗兔二抗进行孵育，通过流式细胞仪来检测各伤寒沙门菌菌株表面Vi抗原的表达量。　　5.伤寒沙门菌OxyRhis6蛋白的表达和纯化:　　将构建成功的pET28a-oxyR重组载体热击入E.coli JM109(DE3)，筛选出阳性菌株。将阳性菌株培养至OD6000.6后，加入IPTG诱导，经过诱导后的菌株，离心取其上清通过含Ni+的亲和层析柱来收集和纯化蛋白。　　6.凝胶阻滞试验:　　将伤寒沙门菌中纯化的OxyRhis6蛋白与含tviA的启动子区域DNA片段孵育，用6％丙烯酰胺胶电泳来检测二者的结合情况。　　结果:　　1.基因芯片分析结果表明，ΔoxyR相对于野生株，有64个基因发生了变化，其中发生上调基因17个，下调基因47个，包括与Vi荚膜抗原表达相关的viaB簇基因。　　2.qRT-PCR表明，在氧应激和非氧应激下，oxyR缺陷都可以使viaB基因簇的基因表达量发生下调。　　3.酶免疫吸附法(ELISA)检测表明，非氧条件下伤寒沙门菌oxyR缺陷能使Vi荚膜抗原的表达量发生了下调。　　4.流式细胞术检测进一步证实了在伤寒沙门菌中，非氧条件下oxyR可影响Vi荚膜抗原的表达。　　5.通过原核表达成功获取伤寒沙门菌OxyRhis6蛋白。　　6.凝胶阻滞试验表明OxyRhis6蛋白与tviA的启动子区域在体外无直接结合。　　结论:　　在伤寒沙门菌中，非氧条件下，oxyR基因的缺陷使得viaB基因簇的表达量发生了下降;同时，oxyR基因对Vi荚膜抗原的表达也有影响。OxyR对Vi荚膜抗原的调节，有可能不是直接通过与其启动子区域相互作用。