随着人类基因组测序工作的完成，对人基因组到底存在多少基因的观点有了很大的改变，从原来认为的将近10万到目前认为的2.4万，这就为理解生物的复杂性与基因的数目之间的关系提出了问题(Mattick JS，2001)。各种非编码RNA(noncodingRNA，ncRNA)基因的发现，为回答以上问题提供了部分答案，但是一个不容质疑的事实是，RNA介导的基因调控大大丰富了既有的基因调控网络，使相同的基因数目有更多的信息输出。一个基因既可以蛋白质的形式行使经典意义上的功能，它同时也可以RNA的形式行使另一个层次上的功能，一个很好的例子是FGF-2和FGF-AS的相互作用(Li AW，et al，1997)。 相当多的证据表明在高等生物中RNA介导的调控普遍存在(Mattick JS，2004)。事实上，相对于蛋白作为调控因子而言，RNAs和靶RNAs或靶DNAs之间的识别和作用比蛋白更精确而特异，RNAs能够更快速的生成和降解，在很多方面尤其在需要非常精细而快速的调节过程中比如细胞分化和胚胎发育，RNA是比蛋白质更理想、更简单的调控因子。RNA介导的调控涉及很多的机制，但是依赖双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)的机制是最常用且最主要的一种。 内源性的dsRNA也就是自然发生的正义-反义转录产物(natural sense-antisense transcripts，NSATs)，鉴定NSATs是理解RNA介导的基因调控一个非常重要的方面。基于RNA介导调控的生物学事件的普遍性，以及最近各种生物的大规模基因组测序和转录组测序的完成，对NSATs进行高通量的筛选与鉴定最得尤为重要与迫切。迄今为止，已有多个研究小组作了相关的探索(Lehner B et al．2002，Shendure J et al．，2002，Yelin R et al．2003，Okazaki Y et al．2002，Kiyosawa H et al．2005)。以上的研究结果带来强烈的信息，那就是NASTs比我们以前想象的多得多。但是，这些研究都是利用计算机进行的序列分析或microarry杂交分析，这些策略有其极大的不可避免的局限性，即仅仅揭示了在一种细胞内或整个物种的转录组里，存在有很多具有形成双链RNA潜能的RNA分子，而无法知道这些RNA在细胞内是否真正形成了双链RNA，因为两条游离的单链的RNA可能分别存在于细胞的不同细胞器或同一个组织或细胞群中的不同细胞里。 为了彻底解决以上工作存在的局限性，实现用实验的手段大规模筛选NSATs，确保所有得到的NSATs在细胞内都是以双链RNA结构的形式真实存在，本研究利用双链RNA分子能够免受单链特异的RNaseⅠ的酶解作用，从而在RNaseⅠ酶解反应中保