因创伤或骨病所致骨缺损在骨科临床十分常见,现有治疗手段均存在某些缺陷。组织工程学技术为骨缺损修复提供了新的途径,这一技术的优点有:移植物具有生物活性、材料来源广泛、可根据所需预制成形、若采用自体细胞则抗原性较低、同时避免了自体异位取骨的并发症等。自美国学者Vacanti等1994年利用组织工程学技术,制备出一定形态结构的小牛活性人工骨后,国内外学者对骨组织工程中种子细胞的获取、支架材料的研制、生长因子的作用、细胞-支架材料立体培养、组织工程骨对骨缺损的修复等方面进行了较为深入的研究,取得了初步成果,证实移植组织工程骨可以促进骨缺损的修复,目前该技术已经在个别国家或地区试用于临床治疗,取得了初步疗效。组织工程学的迅猛发展预示着现代医学将由器官移植时代转为器官重建时代。 为了使该技术更有效的在临床应用,本课题在既往研究基础上,对骨组织工程中的部分关键技术进行深入研究,如对建立具有临床应用价值的种子细胞培养获取体系;建立用于组织构建和细胞植入时,对细胞实时示踪的不同荧光蛋白标记技术;探讨新的组织构建技术和组织工程骨移植后对骨缺损修复的影响。另外,初步探讨异体骨髓间充质干细胞皮下移植后的分布与组织学检测,构建对血管生成具有核心调控作用的缺氧诱导因子-1α基因表达载体,从而为进一步研究创造条件。 研究内容: 1.人骨髓间充质干细胞适宜条件下的体外快速扩增培养和成骨诱导 2.荧光蛋白标记技术对间充质干细胞增殖与分化的影响 3.纤维蛋白凝胶接种技术体外构建组织工程骨的应用研究 4.兔骨髓间充质干细胞同种异体皮下移植存活与定位的研究 5.人缺氧诱导因子-1α基因重组逆转录病毒载体构建及鉴定 6.组织工程骨移植修复兔尺骨骨缺损的实验研究 主要结果和结论: 1.采用自体骨髓间充质干细胞为组织工程骨的种子细胞具有一定的临床应用价值。间充质干细胞可从骨髓穿刺后梯度离心获得,体外培养具有增殖较强,经成骨诱导培养后可表达碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原和骨钙素,并具有形成钙结节的能力。在适宜