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目的:通过检测动脉粥样硬化患者血浆、斑块组织以及泡沫细胞中miR-155的相对表达水平,探讨miR-155参与动脉粥样硬化发生发展的分子机制。方法:1.应用PMA刺激THP-1分化形成巨噬细胞,随后用ox-LDL处理,建立动脉粥样硬化泡沫细胞模型,应用实时荧光定量PCR技术(q RT-PCR)检测泡沫细胞中与心血管疾病密切相关的7个miRNA的表达水平,筛选出升高最明显的miRNA;2.收集AS患者和正常对照血浆标本,利用q RT-PCR技术检测miR-155的相对表达水平;并收集AS患者组织斑块和正常血管组织,检测两组标本中miR-155的相对表达差异;3.应用PMA刺激THP-1分化形成巨噬细胞后,用不同浓度ox-LDL处理不同时间,观察miR-155的表达量随泡沫细胞沉积脂质的量和时间变化而变化的趋势4.应用脂质体转染技术将miR-155的mimic或inhibitor转染泡沫细胞,应用ELISA技术检测炎症因子TNF-α的含量,并用油红O染色技术检测泡沫细胞沉积脂质能力;5.用bioinformatics软件Miranda、Pic Tar、Target Scan等预测miR-155的靶基因,并用双luciferase reporter assay技术验证miR-155直接靶向CARHSP1;6.利用si RNA基因干扰技术或过表达质粒转染技术将CARHSP1 si RNA或CARHSP1过表达质粒转染到泡沫细胞并检测CARHSP1经敲低或过表达后炎症因子TNF-α的含量和泡沫细胞吞脂能力;7.利用western blot技术检测miR-155 mimic或inhibitor转染后,泡沫细胞中miR-155的靶基因CARHSP1及下游炎症因子表达情况。8.应用TRANSFAC数据库结果预测能与miR-155启动子结合的转录因子及其结合位点,应用Ch IP方法和报告基因技术和荧光素酶报告基因技术验证转录因子NF-κB可以转录调控miR-155的表达。结果:1.miR-155在泡沫细胞模型中升高是最明显的;2.miR-155在AS患者血浆中的相对表达量明显高于正常对照;miR-155在AS斑块组织中的表达量也明显高于正常血管组织;3.miR-155在泡沫细胞中的表达量随泡沫细胞摄食脂质的量增多而升高,同时也随泡沫细胞吞脂时间的延长而升高;4.miR-155能降低炎症因子TNF-α的含量并且减弱泡沫细胞沉积脂质的能力;5.Bioinformatics软件预测结果表明CARHSP1是miR-155的靶向基因之一,报告基因技术验证miR-155直接靶向作用CARHSP1 3’UTR;6.CARHSP1被抑制表达后能明显的抑制炎症因子TNF-α释放,而CARHSP1过表达能促进炎症因子TNF-α释放,其中的机制主要是CARHSP1能促进TNF-αmRNA的稳定性;7.在泡沫细胞中,miR-155通过直接靶向作用于CARHSP1从而间接抑制炎症因子TNF-α的表达来减缓动脉粥样硬化炎症反应,进一步削弱泡沫细胞吞脂能力;8.由炎症因子TNF-α等刺激活化的转录因子NF-κB可以与miR-155启动子区结合并转录调节miR-155的表达,使得miR-155的表达升高。结论:miR-155在AS病人体内表达升高,升高的miR-155可以通过miR-155–CARHSP1–TNF-α这个负反馈信号通路减缓AS相关的炎症反应以及抑制泡沫细胞的形成,从而在AS进程中发挥保护性的作用。