斑点叉尾鮰是我国一种重要的淡水经济鱼类。近年来,越来越多的细菌性疾病困扰着斑点叉尾鮰的健康养殖,其中鮰爱德华氏菌病和鲁氏耶尔森氏菌病危害尤为严重。对于水产动物细菌性疾病的防控目前主要采用抗生素,但由此也带来了诸如细菌耐药性增强、药物残留、食品安全和环境污染等问题。作为最为有效的疾病防控方式,疫苗的使用势在必行。采用高分子材料为载体制备渔用口服疫苗已成为当今渔用疫苗研究的热点。本研究以天然高分子材料海藻酸钠为疫苗载体,制备了针对斑点叉尾鮰鮰爱德华氏菌病和鲁氏耶尔森氏菌病的二联口服微球疫苗,并评价了免疫保护效果。具体研究内容包括：1、响应面法优化口服微球疫苗制备工艺及其特性分析为优化渔用口服微球疫苗制备工艺,实验以天然高分子聚合物海藻酸钠为载体,鮰爱德华氏菌灭活疫苗为抗原模型,采用响应面法优化海藻酸钠口服微球疫苗制备工艺,并参照最佳工艺分别制备鮰爱德华氏菌口服微球疫苗和鲁氏耶尔森氏菌口服微球疫苗。通过单因素实验研究海藻酸钠浓度、水油相比例、乳化剂浓度以及乳化时间对微球疫苗包封效率的影响。根据Box-Behnken中心组合实验设计,采用4因素3水平响应面法优化海藻酸钠微球疫苗的制备工艺。结果表明最佳制备工艺条件为：海藻酸钠浓度3.5%,水油相比例2.4：7.6,乳化剂浓度5.4%,乳化时间13 min。对制备的微球特性分析表明,以最佳工艺条件制备的鮰爱德华氏菌微球疫苗和鲁氏耶尔森氏菌微球疫苗成球性好,粒径分布均匀,粒径(8.88±1.26)μm、(8.764±1.73)μm,跨距0.38、0.47,包封效率96.37%、94.51%,具有较好抗酸性、肠溶性以及高安全性的特点。2、口服微球疫苗免疫效果评价为评价海藻酸钠口服微球疫苗的免疫效果,实验按优化后的制备工艺制备鮰爱德华氏菌微球疫苗和鲁氏耶尔森氏菌微球疫苗,口服免疫斑点叉尾鮰,对血清总蛋白、总超氧化物歧化酶、溶菌酶及抗体效价等免疫指标进行检测分析,通过攻毒实验对疫苗免疫保护效果进行评价。结果表明,免疫微球疫苗后的斑点叉尾鮰,血清中总蛋白含量、溶菌酶活力、总超氧化物歧化酶活力均得到显著提高；鮰爱德华氏菌微球疫苗组血清凝集效价峰值出现在第5周,最高1：16,至免疫后第7周仍可检测到特异性抗体；鲁氏耶尔森氏菌微球疫苗组血清凝集效价峰值出现在第5周,最高1：8,至免疫后第8周仍能检测到特异性抗体。分别用鮰爱德华氏菌和鲁氏耶尔森氏菌进行攻毒,口服鮰爱德华氏菌微球疫苗的斑点叉尾鮰获得的抗鮰爱德华氏菌相对免疫保护率为60.7%；口服鲁氏耶尔森氏菌微球疫苗的斑点叉尾鮰获得的抗鲁氏耶尔森氏菌相对免疫保护率为65.5%。综上所述,实验制备的鮰爱德华氏菌微球疫苗和鲁氏耶尔森氏菌微球疫苗能够对鮰爱德华氏菌病和鲁氏耶尔森氏菌病起到较好的预防作用。3、二联口服微球疫苗免疫效果评价为评价鮰爱德华氏菌和鲁氏耶尔森氏菌二联海藻酸钠口服微球疫苗免疫效果,实验制备鮰爱德华氏菌和鲁氏耶尔森氏菌二联微球疫苗,以斑点叉尾鮰为实验动物,口服免疫,设二联微球疫苗低、中、高三个免疫剂量。选择血清总蛋白、总超氧化物歧化酶、溶菌酶及抗体效价等免疫指标对各实验组血清进行检测分析,通过攻毒实验对疫苗免疫保护效果进行评价,采用荧光定量PCR检测口服疫苗对斑点叉尾鮰免疫相关基因转录的影响。结果表明,二联微球疫苗能更长时间的提高非特异性免疫功能,至免疫后第6周二联微球疫苗低、中、高剂量组非特异性免疫指标均与对照组差异极显著(P<0.01)。二联微球疫苗低、中、高剂量组抗体效价峰值均出现在第5周,二联微球疫苗低剂量组最高,抗鮰爱德华氏菌特异性抗体和抗鲁氏耶尔森氏菌特异性抗体分别为1：32和1：16。攻毒后,二联微球疫苗低、中、高剂量组分别可获得抗鮰爱德华氏菌相对免疫保护率为75.0%、67.9%和60.7%；抗鲁氏耶尔森氏菌相对免疫保护率为65.5%、69.0%和65.5%。荧光定量分析结果显示,在头肾和脾脏中二联微球疫苗低剂量组IL-1β1的表达量都极显著高于其它实验组(P<0.01)；TNF-α、MHC-Ⅱβ、CD4L-2的表达量均为二联微球疫苗低剂量组或中剂量组最高。研究表明,鮰爱德华氏菌和鲁氏耶尔森氏菌二联口服微球疫苗可有效增强斑点叉尾鮰免疫功能,能对斑点叉尾鮰鮰爱德华氏菌病和鲁氏耶尔森氏菌病起到较好的预防作用。