天然蜂巢黄酮类化合物的鉴定和活性研究

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本文以蜂巢为实验原材料,对蜂巢的生物活性成分进行了系统分析,运用基质固相分散法优化出蜂巢黄酮类化合物的最佳提取工艺条件,并运用高效液相色谱仪进行含量测定;分离纯化后进行了结构分析。同时本文还对蜂巢中黄酮类化合物的抗氧化活性以及抑菌能力进行了研究,其结果如下:1.通过直接滴定法、凯氏定氮法、茚三酮分光光度法、紫外分光光度法等化学方法对蜂巢中所含的总糖、蛋白质、氨基酸、有机酸等进行了定量分析。2.分析比较了三种蜂巢黄酮类化合物的提取方法,确定了最佳提取方法为基质固相分散法。通过对分散剂、分散剂与样品质量的比例、淋洗剂、淋洗剂用量、洗脱剂、洗脱剂用量等单因素的优化得出,蜂巢黄酮类化合物的最佳提取条件为:采用硅胶为分散剂、分散剂与样品质量比为4:1。以正己烷为淋洗剂,用量为20mL。以甲醇为洗脱剂,用量为20mL。此条件下黄酮类化合物的提取率为5.4mg/g。3.采用高效液相色谱法对蜂巢黄酮化合物进行定性定量分析,以0.2%磷酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱条件下得出的蜂巢黄酮类化合物的提取率分别为芦丁12.68ug/g,桑色素137.72 ug/g、木犀草素23.07 ug/g、槲皮素76.34 ug/g、芹菜素21.09ug/g、白杨素331.98 ug/g、山奈素291.64 ug/g。4.采用D-101型大孔树脂湿法装柱对蜂巢黄酮化合物进行纯化,得到纯化的最佳条件为:以1mL/min的流速上样30mL样品溶液,待其充分吸附后用65%乙醇为洗脱剂,以1mL/min的流速进行洗脱。5.分别采用紫外分光光度计、红外光谱仪、质谱仪等对得到的7个化合物进行结构鉴定。6.采用体外抗氧化模型对蜂巢黄酮类化合物的抗氧化活性进行了研究。以不同浓度的维生素C为对照品,通过测定蜂巢黄酮类化合物对DPPH、超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除率,得出蜂巢黄酮类化合物具有较强的抗氧化活性。7.研究了蜂巢黄酮类化合物的抑菌活性,实验表明蜂巢黄酮类化合物对放线菌(Salmonella Typli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Echerichia coli)、啤酒酵母菌(Saccharomyces)均有抑菌作用。它们的最低抑菌浓度分别为25mg/mL、12.5mg/mL、6.2mg/mL、6.2mg/mL、3.1mg/mL。
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