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目的:大肠埃希菌是引起儿童腹腔感染的主要致病菌,近年来随着抗生素的广泛应用,产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的耐药大肠埃希菌的检出率呈不断上升的趋势。已证实膜孔蛋白的低表达与大肠埃希菌产生耐药性相关,但未有针对膜孔蛋白具体表达量与耐药性的相关研究。本课题主要回顾性分析了天津市儿童医院2010年至2016年腹腔感染患儿中ESBLs阳性大肠埃希菌的检出率及其对常用抗生素的耐药率,并体外检测了不同浓度头孢曲松、拉氧头孢及亚胺培南对拉氧头孢敏感的ESBLs阳性大肠埃希菌生长繁殖的影响,测定了在不同浓度拉氧头孢作用下对拉氧头孢敏感的ESBLs阳性大肠埃希菌的膜孔蛋白OmpF及OmpC的表达量,以探讨膜孔蛋白表达量与耐药性产生的相关性。方法:对天津市儿童医院2010年至2016年腹腔感染患儿送检的标本进行研究,采用VITEK 2 COMPACT60全自动微生物鉴定仪进行菌株鉴定和药物敏感试验,选其中30株对拉氧头孢敏感的ESBLs阳性大肠埃希菌,在不同浓度(分别为MIC值、1/2MIC值、1/4MIC值、1/8MIC值)头孢曲松、拉氧头孢及亚胺培南分别作用0h、12h、24h、36h、48h、60h六个时间点时进行活菌的计数及MIC值的测定并绘制细菌生长曲线;取不同浓度(分别为MIC值、1/2MIC值、1/4MIC值、1/8MIC值)拉氧头孢作用于该30株大肠埃希菌,使用反转录实时荧光定量PCR方法检测作用0h、12h、24h、36h、48h、60h六个时间点时膜孔蛋白OmpF mRNA及OmpC mRNA的表达水平。结果:1.2010年至2016年天津市儿童医院腹腔感染患儿临床分离培养大肠埃希菌共1349株,其中,ESBLs阳性大肠埃希菌的各年的构成比分别为:25.10%、21.01%、20.00%、29.89%、31.03%、33.04%、32.33%。经过行×列卡方检验,结果提示:2010年至2012年与2013年至2016年腹腔感染患儿中ESBLs阳性大肠埃希菌检出率之间差异有统计学意义(P<0.05),呈上升趋势;2010年至2016年,ESBLs阳性大肠埃希菌对氨苄西林、头孢曲松、头孢唑林、头孢噻肟及头孢呋辛的耐药率均大于90%,对阿米卡星、拉氧头孢、呋喃妥因、亚胺培南、美罗培南及哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为0%~5%,而对其他抗菌药物的耐药率为9%~86.6%;2010年至2012年ESBLs阳性大肠埃希菌对拉氧头孢的耐药率与2013年至2016年的耐药率相比,差异有统计学意义(P<0.05),呈上升趋势;ESBLs阴性大肠埃希菌对氨苄西林、庆大霉素及复方新诺明的耐药率为36.1%~78.4%,对其他抗菌药物的耐药率为0%~25.9%。2.高浓度(MIC值、1/2MIC值)的头孢曲松在用药的起始36小时内对大肠埃希菌有一定的抗菌作用,但在之后的24小时,大肠埃希菌的生长速度有明显的上升,而低浓度(1/4MIC值、1/8MIC值)的头孢曲松对大肠埃希菌的抗菌作用则不明显;约占83%的大肠埃希菌在不同浓度拉氧头孢作用下,拉氧头孢浓度越高,抗菌作用越明显,而剩余17%的大肠埃希菌高浓度(MIC值、1/2MIC值)拉氧头孢作用组在作用48小时之后的抗菌作用低于低浓度(1/4MIC值、1/8MIC值)拉氧头孢作用组,其大肠埃希菌的繁殖速度甚至较无抗生素作用的对照组更快;各浓度的亚胺培南均有明显的抗菌作用,且随着亚胺培南的浓度的增高,抗菌作用更加明显。3.约83%大肠埃希菌的OmpF mRNA及OmpC mRNA的表达量在拉氧头孢作用下未见明显变化;而剩余17%大肠埃希菌在高浓度(MIC值、1/2MIC值)拉氧头孢作用48h后,OmpF mRNA及OmpC mRNA呈低表达,但该组大肠埃希菌在低浓度(1/4MIC值,1/8MIC值)拉氧头孢作用下,OmpF mRNA及OmpC mRNA的表达量均未见明显改变。结论:1.ESBLs阳性大肠埃希菌的检出率呈增高的趋势,且对常用抗生素表现出较高的耐药率,对于ESBLs阳性菌株的患儿,可使用的抗生素仅为拉氧头孢及碳青霉烯类抗生素,但ESBLs阳性的大肠埃希菌对拉氧头孢的耐药率也呈现出增高的趋势,临床工作中应依照体外药敏试验结果合理使用抗生素以减少耐药菌株的产生。2.临床分离的ESBLs阳性大肠埃希菌一般对头孢菌素类抗生素耐药,可选择拉氧头孢作为一线药物,但部分拉氧头孢敏感的ESBLs阳性大肠埃希菌(约占17%)在一定浓度(MIC值浓度及1/2MIC值浓度)拉氧头孢作用48h后对大肠埃希菌的抗菌作用下降,大肠埃希菌对拉氧头孢产生耐药性,所以在临床用药的过程中,应该加强对耐药菌株的检测,及时更换抗生素。3.部分拉氧头孢敏感的ESBLs阳性大肠埃希菌(约占17%)在一定浓度(MIC值浓度及1/2MIC值浓度)作用48h后产生对拉氧头孢的耐药性与大肠埃希菌膜孔蛋白OmpF及OmpC的低表达有关,当OmpF及OmpC的表达量分别降至0.592及0.232的时候可提示临床更换碳青霉烯类抗菌药物。尽早更换碳青霉烯类抗生素,可以减少患儿的痛苦,缩短住院时间,更重要的是可减轻耐药菌的变异。