【摘 要】
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本研究的目的是探讨用流式细胞仪分离水牛精子体外受精(IVF)的可行性,建立水牛分离精子IVF的系统。抽取来自屠宰场水牛卵巢表面直径为2～6mm卵泡的卵母细胞,在体外成熟培养后与
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本研究的目的是探讨用流式细胞仪分离水牛精子体外受精(IVF)的可行性,建立水牛分离精子IVF的系统。抽取来自屠宰场水牛卵巢表面直径为2～6mm卵泡的卵母细胞,在体外成熟培养后与流式细胞仪分离的水牛精子进行IVF,受精后8～10h将假定受精的卵子移入颗粒细胞单层进行培养,受精后2 d检查分裂率,6～9 d检查囊胚发育率,1～2级囊胚直接用于移植或者冷冻保存。结果发现:分离精子和未分离精子的分裂率(42.23%比52.28%)和囊胚率(19.98%比28.59%)之间差异均极显著(P<0.01);分离精子和未分离精子IVF后第6、7、8 d所占的囊胚百分比差异不显著(P>0.05);用分离的X和Y精子进行IVF生产的雌性胚胎和雄性胚胎在受精后第6、7、8 d囊胚所占的比例差异不显著(P>0.05);精子分离后在4℃下保存:(1)15—18(2)39—42和(3)69—72 h然后进行IVF,其分裂率分别为39.57%、37.14%和22.14%,囊胚率分别为20.43%、18.29%和11.29%,前两组之间的分裂率和囊胚率差异均不显著(P>0.05),但与第三组的分裂率和囊胚率差异均极显著(P<0.01);分离和未分离精子生产胚胎冷冻—解冻后的存活率分别为70.93%和73.2%,差异不显著(P>0.05)。以上的结果表明:(1)分离的水牛精子可以成功应用于IVF的体系生产出性别控制胚胎;(2)精子分离并没有造成囊胚发育的迟缓;(3)用分离X和Y精子进行IVF所生产的雌性胚胎和雄性胚胎的发育是趋于同步的;(4)精子分离后保存在4℃下42 h内用于体外受精仍可获得正常的分裂率和囊胚率;(5)分离精子IVF生产胚胎可冷冻保存;(6)用水牛分离精子IVF生产的胚胎移植给受体母牛可成功获得妊娠。
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