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据常规嵌合体模型原理,利用具有“十全”特征的地方黑丝毛乌鸡,提出多表现型遗传标记嵌合体模型的概念,并应用于嵌合体检测;通过对囊胚的分离与消化、赤道面开窗、不换壳培养以及供体BCs的转移等一系列嵌合体制作技术的研究,建立家鸡BCs嵌合体批量制作技术;结合新型GFP报告基因,研究以BCs嵌合体为手段的家鸡外源基因导入途径。此外,基于BCs嵌合体种系检测的困境和同型嵌合体与种系嵌合率的关系,探索家鸡W染色体PCR性别鉴定技术在此领域的应用。 结果显示:①丝毛可作为家鸡家鸡嵌合体除黑羽以外的又一个表现型遗传标记,但丝羽发生嵌合的难度更高。②利用受体种蛋赤道面开窗、蛋壳切块复原、不换壳培养等改进的囊胚细胞嵌合体制作技术,实验组最高出壳率为40%(29/73),据表现型判断,出壳的嵌合体率18%(13/73),嵌合体胚26%(19/73)。其中黑肤、毛脚、五趾、黑喙等供体特征也不同程度地出现在嵌合体雏鸡中。③经嵌合体种系传递检测,嵌合体♂×乌骨鸡♀的测交组合,7只嵌合体公鸡中有6号、8号、11号、12号能分别产生比率为2.5%(3/118)、31.6%(6/19)、71.4%(15/21)、33.3%(18/54)的黑羽特征(羽色嵌合体模型意义上的种系嵌合体)后代。而且6号、8号、12号还得到了1.7%(2/118)、10.5%(2/19)、1.8%(1/54)的有“十全”特征(羽色和羽形嵌合体模型意义上的种系嵌合体)后代。嵌合体♀×乌骨鸡♂的测交组合中,获得黑羽、纯乌骨鸡特征率分别为29.4%(35/119)、1.7%(2/119)。饲养至720d,有2只嵌合体公鸡和所有3只嵌合体母鸡仍保持了最初的各种嵌合体特征。④BCs在体外培养4h后,用pEGFP-C1质粒与脂质体(1mg/mL)进行转染,参数为:脂质体5μL,质粒DNA 1.5μg,细胞密度为4个胚,脂质体与DNA形成复合物时间为30min,BCs与脂质体-DNA复合物共培养6h,加入血清后继续培养12h。荧光显微镜下观察发绿色荧光的BCs并计数,转染效率达30%。但随后利用转染BCs进行转基因嵌合体研究,在荧光显微镜下未检测到发绿色荧光的胚。⑤利用W染色体的PCR体外扩增出的447bp带,能灵敏准确检测囊胚和雏鸡性别,可望从同型嵌合体角度进行提高BCs种系嵌合率的研究。