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NIF3类(NGG1pinteractingfactor3like)蛋白的命名起源于酵母的NIF3蛋白,它可以和转录调节因子NGG1p相互作用,但是作用机制还不清楚,所以被归属为未知功能蛋白。在一些哺乳动物细胞的研究中已发现该类蛋白通过与其它蛋白协同作用调节转录,并且与神经分化及一些疾病相关。
将本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库通过blast进行比对,从中发现了一个含有NIF3保守结构域的cDNA序列,我们将其命名为BmNIF31,登录号为DN985198.1。这个BmNIF31基因含有五5个外显子,4个内含子,ORF为816bp,编码含有271个氨基酸残基的蛋白,称之为BmNIF31,预测分子量为29.9kDa,等电点为6.00。我们利用大肠杆菌表达系统成功表达了含有His标签的BmNIF31融合蛋白,分子量合计为33683.53Da。用HiTrapChelatingHP亲和层析柱纯化融合的目的蛋白,经FPLC反相柱层析进一步纯化,然后进行质谱分析,得到该融合蛋白的分子量为33668.0Da,证实了该蛋白表达的正确性。用得到的融合目的蛋白为抗原免疫1只新西兰白兔,制备该融合蛋白的多克隆抗体。ELISA检测该抗血清(多克隆抗体)的效价可达到1:64000以上。用制备的多克隆抗体通过Westernblotting检测发现,BmNIF31蛋白在家蚕五龄幼虫中代谢、分化比较明显的丝腺、表皮、脂肪体、肠等组织中均有表达。荧光定量PCR的结果表明,家蚕BmNIF31mRNA在家蚕的各个发育时期及不同组织中广泛存在,其中在家蚕的各个发育时期中五龄幼虫和蛹中的表达量较高,蛾的表达量较低,在处于滞育期的卵中没有检测到信号;在五龄幼虫的表皮、丝腺、生殖器、马氏管、头、气门、肠、脂肪体等组织中BmNIF31mRNA的含量依次减少。我们用免疫荧光和报告基因两种方法对家蚕的Bm5细胞进行亚细胞定位时发现,BmNIF31蛋白在正常的细胞中主要存在于细胞质中:而在经10-5M的全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)诱导的Bm5细胞中,BmNIF31蛋白在细胞核中的含量明显增加,而ATRA主要是通过调节基因转录行使功能的。结合BmNIF31蛋白由细胞质到细胞核的迁移,我们推测,BmNIF31蛋白在ATRA诱导的Bm5细胞生理变化的过程具有调节基因转录的功能。