一种家蚕新基因BmNIF3-like的表达分析与亚细胞定位研究

来源 :浙江理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ccqccqccq
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
NIF3类(NGG1pinteractingfactor3like)蛋白的命名起源于酵母的NIF3蛋白,它可以和转录调节因子NGG1p相互作用,但是作用机制还不清楚,所以被归属为未知功能蛋白。在一些哺乳动物细胞的研究中已发现该类蛋白通过与其它蛋白协同作用调节转录,并且与神经分化及一些疾病相关。 将本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库通过blast进行比对,从中发现了一个含有NIF3保守结构域的cDNA序列,我们将其命名为BmNIF31,登录号为DN985198.1。这个BmNIF31基因含有五5个外显子,4个内含子,ORF为816bp,编码含有271个氨基酸残基的蛋白,称之为BmNIF31,预测分子量为29.9kDa,等电点为6.00。我们利用大肠杆菌表达系统成功表达了含有His标签的BmNIF31融合蛋白,分子量合计为33683.53Da。用HiTrapChelatingHP亲和层析柱纯化融合的目的蛋白,经FPLC反相柱层析进一步纯化,然后进行质谱分析,得到该融合蛋白的分子量为33668.0Da,证实了该蛋白表达的正确性。用得到的融合目的蛋白为抗原免疫1只新西兰白兔,制备该融合蛋白的多克隆抗体。ELISA检测该抗血清(多克隆抗体)的效价可达到1:64000以上。用制备的多克隆抗体通过Westernblotting检测发现,BmNIF31蛋白在家蚕五龄幼虫中代谢、分化比较明显的丝腺、表皮、脂肪体、肠等组织中均有表达。荧光定量PCR的结果表明,家蚕BmNIF31mRNA在家蚕的各个发育时期及不同组织中广泛存在,其中在家蚕的各个发育时期中五龄幼虫和蛹中的表达量较高,蛾的表达量较低,在处于滞育期的卵中没有检测到信号;在五龄幼虫的表皮、丝腺、生殖器、马氏管、头、气门、肠、脂肪体等组织中BmNIF31mRNA的含量依次减少。我们用免疫荧光和报告基因两种方法对家蚕的Bm5细胞进行亚细胞定位时发现,BmNIF31蛋白在正常的细胞中主要存在于细胞质中:而在经10-5M的全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)诱导的Bm5细胞中,BmNIF31蛋白在细胞核中的含量明显增加,而ATRA主要是通过调节基因转录行使功能的。结合BmNIF31蛋白由细胞质到细胞核的迁移,我们推测,BmNIF31蛋白在ATRA诱导的Bm5细胞生理变化的过程具有调节基因转录的功能。
其他文献
学位
目的观察雌激素缺乏对大鼠海马CA1/CA2区和额叶皮层HCNP的含量和ChAT、M1 AChR、α7 nAChR及NMDA受体亚单位NR1基因表达的影响。方法1实验动物分组将4月龄雌性SD大鼠30只随机
摘要:美育的直接职能是审美能力的培养,即提高审美的感受力、鉴赏力和创造力。本文分析了初中英语审美能力培养的内容、主要途径和基本方法,探讨了其培养策略。  关键词:初中英语;审美能力;培养;途径;方法  中图分类号:G632.0 文献标识码:A 文章编号:1992-7711(2017)07-0046  在初中英语教学中,可以利用英语中的美育因素,将其融化于初中英语教学过程,这样既能陶冶学生的情操,又
摘要:随着新课改的深入推进,将创新理念融入高中物理教学中已是必然趋势。新时期的高中生不同于以往的高中生,他们个性鲜明,不喜欢被束缚与限制,这就需要高中物理教师在教学中要采取创新的教学思路,为学生设计出符合他们认知、学习特点的教学内容及方式,这样他们的学习兴趣会不断提升,自然创新学习的意识、思维及能力也会不断提升,非常有益于教与学的共同进步。笔者以新课改下高中物理教学创新思路为研究中心,对其现状及策
目的:近年来,慢性间歇性低压低氧(chronic intermittent hypobaric hypoxia, CIHH)对心脏的保护作用已被广泛认可和关注。大量研究表明,CIHH具有明显的抗心肌缺血/再灌注或低
摘要:本文浅要谈了在体育教学中需要注重创新教育,并提出要注重教学内容创新,注重教学手段创新,注重教学方式创新,注重教学评价创新,注重教学空间创新。  关键词:体育教学;创新;教师;学生  中图分类号:G633.96 文献标识码:A 文章编号:1992-7711(2017)07-0048  作为“00后”的现代中学生,他们个性十分鲜明,喜欢争强好胜,乐于在同伴或者教师面前表现自己,意识不到潜在的危险
曼蝽属(Menida Motschulsky)隶属于半翅目异翅亚目(Hemiptera-Heteroptera)蝽科(Pentatomidae)蝽亚科(Pentatominae)。本文对中国曼蝽属进行了分类学研究,同时基于几何形态学G
研究目的:观察腺病毒(Adenovirus,Ad)介导E2F—shRNA转移对人视网膜母细胞瘤(Retlnoblastoma,RB)眼前房移植瘤生长的抑制作用。 研究方法:利用脂质体介导编码E2F—shRNA的表达
摘要:合作学习被广大教师广泛运用,其不但能够营造良好的学习氛围、突出学生的主体地位,还能提高学生的交往能力。笔者在自己的教学实践中探索了分组、教学和评价三步骤,并思考在合作学习中要注意明确小组分工、选择合适内容及发挥教师的作用等。  关键词:小学数学课堂;合作学习;教学活动  中图分类号:G633.6 文献标识码:A 文章编号:1992-7711(2017)07-0049  早在2000年以前,我
用不同权重的核磁共振T2加权成象数据在采样过程中完成叠加,所得到的核磁共振T2加权图象清晰地显示出大白鼠大脑中缺血损伤区域的位置和大小.用该方法研究大白鼠的光化学反应局部脑