论文部分内容阅读
目的：本研究旨在明确肝细胞生长因子(HGF)是否对肝癌细胞株HepG2有生长抑制作用及其可能机制以及HGF能否诱导肝癌细胞发生凋亡；探讨HGF与吡柔比星(Pirarubicin或Theprubicin，THP)在体外联合应用对肝癌细胞是否有协同治疗作用；探讨HGF在肝细胞癌治疗中的应用价值，为今后进一步研究提供可行性和相应的理论依据。方法：以人肝癌细胞株HepG2为研究对象，采用MTT比色试验法，检测不同HGF浓度和作用时间对肝癌细胞生长增殖的影响；免疫细胞化学染色检测细胞增殖核抗原(PCNA)的表达；应用DNA荧光染料Hoechst33258对肝癌细胞核染色，荧光显微镜下观察凋亡细胞形态并计算凋亡指数和采用流式细胞术(FCM)检测HGF作用后肝癌细胞凋亡率的变化；采用FCM检测HGF对肝癌细胞生长周期和RT-PCR技术，检测HGF对肝癌细胞p16基因表达的影响。结果：1：MTT比色试验显示HGF对人肝癌细胞HepG2活性有显著的抑制作用，并且呈现时间和剂量的依赖性，随药物浓度加大和作用时间延长，存活细胞数量逐渐减少。2：HGF对HepG2细胞的增殖活性具有抑制作用，药物作用4d后细胞PCNA的表达显著降低。3：Hoechst染色实验及流式细胞术结果显示HGF可诱导HepG2细胞凋亡。与对照组比较，实验组细胞凋亡指数(AI)和凋亡率(AR)明显增加[对照组分别为(8.53±0.75)％，(10.86±3.38)％，而10ng/mL、50ng/mLHGF作用4d后，HepG2细胞的凋亡指数分别为：(15.86±3.05)％，(21.4±4.34)％；凋亡率分别为：(17.53±1.58)％，(20.73±4.70)％]。4：随着HGF浓度增大S期细胞明显减少[试验组10μg/L，50μg/LHGF：(7.5±4.4)％，(7.8±1.6)％vs对照组0μg/LHGF:16.6±2.8％；P＜0.05，P＜0.01]同时可见G0/G1期细胞累积现象[试验组10μg/L，50μg/LHGF：(80.5±3.2)％，(73.1±3.9)％vs对照组0μg/LHGF：(59.6±6.2)％；P＜0.05，P＜0.01]。5：经HGF作用后肝癌细胞的p16基因表达上调。6：肝癌细胞经HGF和THP联合处理后，细胞凋亡率与坏死比例升高，分别与单纯HGF或单纯THP处理组相比差异显著。结论1：HGF可通过抑制细胞增殖和诱导凋亡途径抑制人肝癌细胞HepG2的生长。2：HGF通过上调p16表达阻滞细胞分裂于G0/G1期，可能为其抑制人肝癌细胞HepG2的生长作用的重要机制之一。3：HGF与THP在体外联合应用对肝癌细胞(HepG2)化疗具有协同作用。HGF有望在肝癌的治疗中发挥重要作用。