【摘 要】
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目的CsA为小分子环状十一肽化合物,只是半抗原分子,不具有免疫原性,而且其结构中缺乏与载体蛋白相偶联的活性基团。本课题的目的是设计正确的合成路线,优化合成工艺,制备CsA
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目的CsA为小分子环状十一肽化合物,只是半抗原分子,不具有免疫原性,而且其结构中缺乏与载体蛋白相偶联的活性基团。本课题的目的是设计正确的合成路线,优化合成工艺,制备CsA完全抗原。首先对CsA分子的化学结构进行修饰,引入活性基团;然后与蛋白载体相偶联,形成完全抗原。制备环孢素A完全抗原,为荧光偏振免疫监测试剂盒的研制作准备。方法课题选择光化学反应对CsA分子的化学结构进行修饰,引入活泼基团-羧基。光敏交联剂选择4-苯甲酰苯甲酸。以高压汞灯作为紫外光源,叔丁醇作为反应溶剂,进行4-苯甲酰苯甲酸(BBa)和环孢素A(CsA)的提氢-偶合及光环化加成反应,得到中间体CsA-BBa共轭物。实验过程中采用正交试验的方法优化了合成工艺,确定了最佳的合成条件。偶联反应选择聚L-赖氨酸(PL)作为蛋白载体。将CsA-BBa共轭物溶于DMF中,再在EDCI作用下与水溶液中的聚L-赖氨酸(PL)反应,生成完全抗原CsA-BBa-PL。结果实验对反应物4-苯甲酰苯甲酸(BBa)、环孢素A(CsA)以及反应产物CsA-BBa分别做了熔点测定、薄层分析、红外谱图、氢谱、碳谱从及质谱的分析鉴定,证实该方法可以成功的合成CsA-BBa。对合成的环孢素A完全抗原采用酶联免疫吸附分析方法检测,证实该完全抗原可以与环孢素A单克隆抗体发生特异性反应。结论本研究成功地合成了CsA完全抗原,为FPIA法检测环孢素A浓度的试剂盒研制奠定了基础。
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